[發明專利]一種外泌體的分離方法及其分離裝置

在審

• 申請號: 201810211036.2
• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN108865971A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 郭秋泉;趙呈春;楊軍
• 申請（專利權）人: 深圳拓撲精膜科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12M1/12;B01D71/02;B01D67/00
• 代理公司: 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防

1.一種外泌體的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將含有外泌體的血液、尿液、唾液、腦脊液、乳汁、腹水或者羊水經過濾或者離心除去大于1微米的雜質；(2)使用孔徑與外泌體直徑大小對應的均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜過濾；(3)收集濾液或均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜上的外泌體。

2.根據權利要求1所述的一種外泌體的分離方法，其特征在于，所述步驟(1)中采用微濾膜過濾除去大于1微米的雜質。

3.根據權利要求1所述的一種外泌體的分離方法，其特征在于，所述步驟(2)采用孔徑為300nm的均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜或者先用孔徑為300nm、再用孔徑為30nm的均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜過濾。

4.根據權利要求3所述的一種外泌體的分離方法，其特征在于，所述步驟(2)中均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜的厚度為10～60微米。

5.根據權利要求1～4中任一所述的一種外泌體的分離方法，其特征在于，所述步驟(2)中使用的均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜是按照以下步驟制作的：

(1)鋁片前處理：用丙酮超聲清洗后再用5％氫氧化鈉溶液清洗，之后用自來水沖洗，最后用去離子水沖洗，烘干備用；

(2)鋁片拋光：將步驟(1)備好的鋁片置于體積比為4:1的乙醇:高氯酸溶液中電解拋光，拋光完后用清水及去離子水沖洗干凈，放置晾干；

(3)一次電解：采用硫酸，草酸或者磷酸溶液對鋁片進行電解；

(4)去氧化層：采用磷鉻酸去除鋁片上的第一次電解形成的氧化層；

(5)二次電解：采用硫酸，草酸或者磷酸溶液對鋁片進行第二次電解；

(6)去鋁基：將鋁片未經電解的一面朝下放入5％～10％的氫氧化鈉溶液中把背面的氧化層去除，之后放入氯化銅溶液中去除鋁基，鋁基去干凈后用自來水及去離子水沖洗干凈并靜置；

(7)去除阻擋層和擴孔：將去除完鋁基的陽極氧化鋁薄膜正面朝上漂浮在磷酸溶液的表面10～180分鐘后取出，放入去離子水中靜置5分鐘以上并沖洗干凈；

(8)采用激光切割成所需尺寸即得。

6.根據權利要求1～4中任一所述的一種外泌體的分離方法，其特征在于，所述步驟(2)中使用的均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜在使用之前先經親水處理。

7.根據權利要求6所述的一種外泌體的分離方法，其特征在于，所述的對均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜進行親水處理的方法為：用過氧化氫溶液浸泡均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜10～20小時；或者用氧氣等離子體清洗均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜表面3～5分鐘；或者用多巴胺對均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜進行表面包裹。

8.實現權利要求1～7任一所述方法采用的外泌體分離裝置，包括膜過濾器，其特征在于，所述膜過濾器中的濾膜是均勻孔徑陽極氧化鋁薄膜。