[發明專利]一種基于鈀摻雜二硫化鉬納米球的電化學免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810209936.3
• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN108535342B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 李月云;高增強;張春燕;張栓;王平;劉青;董云會;王粵博
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于鈀摻雜二硫化鉬納米球的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）鈀摻雜二硫化鉬納米球的制備

1) 將0.5~1.5 mmol四水合鉬酸銨，10~20 mmol硫脲和0.005~0.015 mmol聚乙烯吡咯烷酮依次加入到35 mL超純水中，磁力攪拌形成均一溶液A；

2）將溶液A轉移到高溫反應釜中，在220oC條件下，反應18h，離心分離，分別用超純水，無水乙醇洗滌以除去雜質，將產物置于冷凍干燥機中凍干，制得二硫化鉬納米球；

3）將30~70 mmol十六烷基三甲基溴化銨溶解在10mL超純水中，超聲10~20 min，得到均勻溶液B；然后將1~5 mg二硫化鉬納米球加入到溶液中B中，混合溶液變成灰黑色，持續超聲10~20 min，制得十六烷基三甲基溴化銨改性的二硫化鉬納米球；

4) 將10~40 mL、1mmol/L的H₂PdCl₄溶液置于二硫化鉬納米球懸浮液中，超聲處理60min，快速注入2~8 mL、10mmol/L的抗壞血酸溶液，快速倒置20~40s，靜置6h，離心、水洗，將棕色沉淀物在室溫下干燥，得到鈀摻雜二硫化鉬納米球；

（2）電化學免疫傳感器的制備

1）玻碳電極經Al₂O₃粉打磨至鏡面，用超純水徹底清洗干凈；

2）將6μL濃度為0.5~2.5 mg/mL的鈀摻雜二硫化鉬納米球溶液滴加到電極表面，4oC下干燥；

3）繼續滴加6μL濃度為6~12μg/mL的N末端B型利鈉肽原抗體溶液于電極表面，4oC保存至干燥；

4）繼續滴加3μL質量分數為0.5~1%的牛血清白蛋白溶液，以封閉電極表面的非特異性活性位點，用pH為7.4的PBS緩沖溶液沖洗電極表面，4oC晾干；

5）分別滴加6μL不同濃度的N末端B型利鈉肽原于上述電極表面，4oC下孵化20~40min，用pH為7.4的PBS緩沖溶液沖洗電極表面，4oC晾干。

2.根據權利要求1所述的一種基于鈀摻雜二硫化鉬納米球的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，通過水熱法一步合成了二硫化鉬納米球，然后用陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨對其改性，并運用原位還原法使鈀納米粒子均勻分布改性的二硫化鉬納米球上。

3.根據權利要求1所述的制備方法制備的一種基于鈀摻雜二硫化鉬納米球的電化學免疫傳感器，其特征在于，所述電化學免疫傳感器能夠用于N末端B型利鈉肽原的檢測。

4.根據權利要求1所述的一種基于鈀摻雜二硫化鉬納米球的電化學免疫傳感器的制備方法制備的電化學免疫傳感器，其特征在于，所述電化學免疫傳感器用于N末端B型利鈉肽原的檢測，檢測步驟如下：

（1）將飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的電化學免疫傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.0 ~ 8.04磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；

（2）用時間-電流法對分析物進行檢測，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔 0.1 s，運行時間400 s；

（3）當背景電流趨于穩定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH = 7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化；

（4）將待測的N末端B型利鈉肽原樣品溶液代替N末端B型利鈉肽原抗原標準溶液進行檢測。