[發明專利]檢測結核分枝桿菌γ干擾素的層析方法及試紙條制備方法

在審

• 申請號: 201810207509.1
• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN108490189A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 張明皓;周曉東;王銳
• 申請（專利權）人: 江蘇瑞安生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種熒光免疫層析方法，其特征在于，包括：

陰性對照培養管、陽性對照培養管、測試培養管、熒光定量檢測試紙條和檢測器；其中

陰性對照培養管為含有抗凝血物質的培養管；

陽性對照培養管為含有抗凝血物質和細胞凝集素的培養管；

測試培養管為含有抗凝血物質和結核分枝桿菌特異性刺激抗原的培養管；

熒光標記物為量子點微球；

檢測器為熒光檢測器。

2.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，

所述熒光免疫層析方法還包括：

在陰性對照培養管、測試培養管、陽性對照培養管中分別加入血樣，并使血樣與各培養管中的物質充分混合均勻后靜置，以吸取相應培養管中的上清液；

將各上清液分別加入相應樣本緩沖液混合后，加入到熒光定量檢測試紙條的加樣孔中，由熒光檢測器進行檢測。

3.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，

所述結核分枝桿菌特異性刺激抗原為ESAT6和CFP10的獨立蛋白混合或ESAT6和CFP10的融合蛋白。

4.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，

所述抗凝血物質為肝素鈉和/或肝素鋰。

5.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，

所述細胞凝集素為植物凝集素和/或刀豆凝集素。

6.一種熒光定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，包括：

熒光微球標記物制備；

樣品墊的處理；

制備檢測線和質控線；以及

熒光定量檢測試紙條的組裝。

7.根據權利要求6所述的熒光定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，

所述熒光微球標記物制備包括：

結核分枝桿菌γ干擾素量子點熒光微球標記物的制備；和

兔IgG量子點熒光微球標記物的制備。

8.根據權利要求7所述的熒光定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，

制備檢測線和質控線的方法包括：

將結核分枝桿菌γ干擾素包被抗體固定于硝酸纖維素膜上作為檢測線，將羊抗兔二抗固定于硝酸纖維素膜上作為質控線。

9.根據權利要求8所述的熒光定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，

所述樣品墊的處理方法包括：

用含有蔗糖和RBC的Tris緩沖液浸泡玻璃纖維素膜2-4h，然后置于37℃鼓風干燥箱中烘烤16-24小時至完全干燥，置于干燥環境中保存備用；

其中樣品墊材質為玻璃纖維素膜。

10.根據權利要求9所述的熒光定量檢測試紙條的制備方法，其特征在于，

所述熒光定量檢測試紙條的組裝方法包括：

在PVC底板上依次搭接地粘貼：樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水紙，并剪切成4mm寬的試紙條裝入卡殼中，即成為結核分枝桿菌γ干擾素免疫熒光定量檢測試紙條。