[發(fā)明專利]用于檢測福氏志賀氏菌的特異性引物和探針以及實時熒光定量PCR試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810205787.3
• 申請日: 2018-03-13
• 公開（公告）號: CN108660228A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳玲;徐紅;車團結(jié);陳游;高愷;李亞鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州百源基因技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/11;C12Q1/6851;C12R1/01
• 代理公司: 北京中恒高博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

1.用于檢測福氏志賀氏菌的特異性引物和探針，其特征在于：所述探針序列為：5’-AGACGCCATCTCTTCTCG-3’；

所述特異性引物為下述序列或為下述序列的互補鏈序列：

上游引物序列為5’-TATAGTTTAGCTTGCCTTT-3’；

下游引物序列為5’-CTATTTCTGATAAATTCAAGTTAT-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性引物和探針，其特征在于：探針中5’端標記的熒光報告基團為FAM，3’端標記的熒光淬滅基團為BHQ。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性引物和探針，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物為向5’端和/或3’端方向延伸一至數(shù)個堿基或刪減一至數(shù)個堿基得到的序列。

4.一種用于檢測福氏志賀氏菌的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：所述實時熒光定量PCR試劑盒包括權(quán)利要求1-3任一項所述的特異性引物和探針。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：在20μl PCR反應體系中，所述上游引物的用量為0.2μl，所述下游引物的用量為0.2μl，所述探針的用量為0.2μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：所述實時熒光定量PCR試劑盒還包括系列濃度標準品和陽性對照；所述系列濃度標準品是將福氏志賀氏菌16S基因與載體連接，轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細胞中誘導表達，提取重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒定量后稀釋，得到系列濃度標準品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：所述標準品的核苷酸序列為序列表中序列2。

8.權(quán)利要求1-3任一所述的特異性引物和探針、權(quán)利要求4-7任一所述的實時熒光定量PCR試劑盒在如下任一中的應用，所述應用不以疾病的診斷和治療為目的：

(1)定性或定量檢測或輔助檢測福氏志賀氏菌；

(2)制備定性或定量檢測或輔助檢測福氏志賀氏菌的產(chǎn)品。

9.一種檢測或輔助檢測待檢樣品中是否含有福氏志賀氏菌的方法，該方法不以疾病的診斷和治療為目的，其特征在于：分別以系列濃度標準品和待測樣品DNA為模板，利用特異性引物和探針進行實時熒光定量PCR，繪制標準曲線，通過標準曲線和待測樣品的Ct值判定結(jié)果。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR的反應條件為：94℃預變性2分鐘，94℃10秒、60℃30s并收集熒光信號，40個循環(huán)。