[發明專利]一種單細胞基因組拷貝數變異的檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201810201022.2
• 申請日: 2018-03-12
• 公開（公告）號: CN108410970A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 郭弘妍;田婕;鄧莉莉;邢婉麗;程京;張怡然
• 申請（專利權）人: 博奧生物集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/6858;C40B50/06
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

1.Tn5蛋白復合物，其特征在于，包括Tn5蛋白和oligo，所述oligo包括OligoA、Oligo5X和Oligo7X中的一種或兩者以上的混合物；

其中，OligoA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

Oligo5X的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

Oligo7X的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.根據權利要求1所述的Tn5蛋白復合物，其特征在于，所述Oligo5X的核苷酸序列由核心序列和barcode序列組成，其中barcode序列位于Oligo5X核苷酸序列的第22位到第29位；所述Oligo7X的核苷酸序列由核心序列和barcode序列組成，其中barcode序列位于Oligo7X核苷酸序列的第28位到第35位。

3.根據權利要求1或2所述的Tn5蛋白復合物的制備方法，其特征在于，取OligoA、Oligo5X和Oligo7X混合后經90～98℃溫浴3～6min后21～25℃放置1～3h。

4.根據權利要求3所述的Tn5蛋白復合物的制備方法，其特征在于，取OligoA、Oligo5X和Oligo7X混合后經94℃溫浴5min后21～25℃放置1h。

5.組合物，其特征在于，包括片段化buffer、如權利要求1或2所述或如權利要求3或4所述制備方法制得的Tn5蛋白復合物、擴增buffer、通用引物、擴增酶中的一種或兩者以上的混合物。

6.根據權利要求5所述的組合物，其特征在于，包括如下組分：

7.根據權利要求5或6所述的組合物，其特征在于，包括如下組分：50mM TAPS-NaOH(pH8.5，25℃)，25mM MgCl₂，50％v/v DMF。

8.根據權利要求5至7任一項所述的組合物在單細胞基因組文庫構建或單細胞基因組測序中的應用。

9.一種試劑盒，包括如權利要求5至7任一項所述的組合物。

10.根據權利要求9所述的試劑盒在單細胞基因組文庫構建或單細胞基因組測序中的應用。

11.如權利要求5至7任一項所述的組合物或如權利要求9所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，以ng/μL計，取單細胞擴增產物預處理后與所述組合物按照質量體積比為(1～100):24混合，擴增；

所述擴增的程序為：

55℃，10min；72℃，3min；94～98℃，30s；

94～98℃，15s；60～62℃，30s；72℃，3min，13～18cycles；

72℃，5min；

16℃，保溫。

12.單細胞基因組文庫的構建方法，其特征在于，以ng/μL計取單細胞擴增產物預處理后與如權利要求5至7任一項所述的組合物或如權利要求9所述的試劑盒中的所述組合物按照質量為(1～100):24混合，擴增；

所述擴增的程序為：

55℃，10min；72℃，3min；94～98℃，30s；

94～98℃，15s；60～62℃，30s；72℃，3min，13～18cycles；

72℃，5min；

16℃，保溫。

13.根據權利要求12所述的構建方法，其特征在于，所述擴增程序為：

55℃，10min；72℃，3min；98℃，30s；

98℃，15s；60℃，30s；72℃，3min，13～18cycles；

72℃，5min；

16℃，保溫。