[發(fā)明專利]一種栝樓嫩葉的組培育苗方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810194125.0
• 申請(qǐng)日: 2018-03-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108293878B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 席培宇;王濟(jì)紅;蔡國(guó)俊;張麗敏;張建利;李安定;龍琴秀;彭熙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州省生物研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01G22/00
• 代理公司: 貴陽(yáng)中工知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 52106
• 代理人: 劉安寧

一種栝樓嫩葉的組培育苗方法，包括外植體抗褐化、消毒處理、葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽誘導(dǎo)分化及繼代增殖、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽等技術(shù)環(huán)節(jié)。本法是以剛萌發(fā)的帶葉柄嫩葉為外植體，先后用維C、高錳酸鉀水溶液浸泡消毒的處理方式，降低外植體褐化率和污染率，使外植體初誘導(dǎo)接種成活率達(dá)95%；通過(guò)在培養(yǎng)基中添加活性炭和聚乙烯吡咯烷酮來(lái)吸附和抑制有害物質(zhì)，達(dá)到提高外植體分化率、降低褐變率的效果。本發(fā)明首次采用細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)組合后直接誘導(dǎo)葉片分化愈傷組織，減少先誘導(dǎo)不定芽分化的環(huán)節(jié)，提高組培育苗效率；采用苗床覆蓋小拱棚的方式定植瓶苗，移栽成活率達(dá)90%以上。本方法可為栝樓良種工廠化育苗利用提供技術(shù)支撐。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)的植物再生，進(jìn)一步而言，涉及栝樓嫩葉的組培育苗方法。

背景技術(shù)

栝樓（Trichosanthes kirilowii）為葫蘆科栝樓屬多年生攀援藤本植物，產(chǎn)遼寧、華北、華東、中南、西北、四川、貴州和云南。其根（天花粉）、果實(shí)（瓜蔞）、果皮（瓜蔞皮）、種子（瓜蔞仁）均是常用中藥材，用于治療多種疾病。此外，其果實(shí)可美容、觀賞，種子、根可食用，全株可用于綠化。由于經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，近年來(lái)其種植范圍越來(lái)越廣、種植面積逐步擴(kuò)大。栝樓為雌雄異株，開(kāi)花前無(wú)明顯的形態(tài)差異，難以分辯，而種子繁殖的幼苗，雌雄比例約為3：7，而栝樓栽培雌雄植株的合理配比為10∶1，種子苗栽培利用直接影響產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益。分根繁殖雖然能分辨雌雄株，但繁殖系數(shù)低，且種苗容易退化，使發(fā)展良種生產(chǎn)受到一定限制。只有通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)，才能實(shí)現(xiàn)栝樓種苗雌雄株定向培養(yǎng)，解決雌雄株合理配比的問(wèn)題。目前栝樓組織培養(yǎng)技術(shù)研究報(bào)道較多，主要存在幼嫩外植體殺菌不徹底，傷口容易褐變，移栽成活率低等問(wèn)題，導(dǎo)致工廠化組培育苗困難，無(wú)法滿足規(guī)模化生產(chǎn)種苗的需要。

以栝樓頂芽、腋芽、帶芽莖段、葉片、塊莖幼苗的莖尖和卷須等為外植體選擇的研究均有報(bào)道，大部分研究表明，帶芽莖段是較好的外植體。由于栝樓嫩芽帶有絨毛，如果殺菌時(shí)間較短，則容易污染，殺菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則外植體剪口容易氧化褐變，外植體消毒不徹底導(dǎo)致初誘導(dǎo)不成功是當(dāng)前栝樓組培育苗技術(shù)急需攻克的技術(shù)難點(diǎn)之一。大部分研究均采用75%乙醇聯(lián)合0.1%升汞的植物組織培養(yǎng)常用消毒方法，污染率在5.0%～42.8%；采用5.2%次氯酸鈉替代0.1%升汞后，污染率為31.4%；選用75%乙醇聯(lián)合0.31% 升汞進(jìn)行外植體消毒，污染率為31%～41%。中國(guó)專利申請(qǐng)件CN105191800A《一種栝樓脫毒組培快繁的方法》對(duì)腋芽采用42℃熱水處理65min后獲得脫毒材料，經(jīng)脫毒煉苗和組織培養(yǎng)后獲得脫毒苗，但未對(duì)污染率和誘導(dǎo)成活率做具體報(bào)道。余慧琳等（2009）將栝樓莖段洗凈，切成2cm左右小段，放入高錳酸鉀500倍液浸泡40min后，放入新潔爾滅500倍液浸泡30min，再用75%酒精與0.1%升汞或體積比為1∶25的次氯酸鉀溶液消毒處理，發(fā)現(xiàn)可以減緩?fù)庵搀w的褐化。佟宏霞等（1996）發(fā)現(xiàn)，在栝樓初誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加水解酪蛋白有利于外植體抗褐化，添加GA會(huì)加速外植體褐化。