[發明專利]一種栝樓嫩葉的組培育苗方法

有效

• 申請號: 201810194125.0
• 申請日: 2018-03-09
• 公開（公告）號: CN108293878B
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 席培宇;王濟紅;蔡國俊;張麗敏;張建利;李安定;龍琴秀;彭熙
• 申請（專利權）人: 貴州省生物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G22/00
• 代理公司: 貴陽中工知識產權代理事務所 52106
• 代理人: 劉安寧

1.一種栝樓嫩葉的組培育苗方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)外植體消毒：采集剛萌發5～10天的栝樓帶葉柄嫩葉做外植體；沖洗干凈后，用3000mg.L^-1維生素C蒸餾水溶液浸泡40min，然后用2500mg.L^-1高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3～5次，再用1000mg.L^-1氯化汞水溶液常規消毒10min，蒸餾水沖洗5次；

(2)組織培養條件的設定：各階段的基本培養基均為：1/2MS+12g.L^-1瓊脂+30g.L^-1蔗糖，pH值6.0；培養條件為：溫度24℃～26℃，光照為1500～2000Lux，光照時間為12～14h/d；

(3)愈傷組織誘導培養：將消毒后外植體的葉柄插入培養基中，葉片部分出露，誘導葉片分化愈傷組織；培養30天后，可產生直徑1.5cm的綠色疏松愈傷組織；培養基配方：基本培養基+1.0g.L^-1活性炭+1.0g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮+1.0mg.L^-1噻苯隆+0.1mg.L^-12,4-二氯苯氧乙酸+0.5mg.L^-1萘乙酸；

(4)叢生芽誘導培養：將初誘導培養產生的愈傷組織分成直徑0.5cm的小塊后接種到叢生芽誘導培養基上；培養35天后，每塊可分化5～8個叢生芽；基本培養基配方：+1.0g.L^-1活性炭+1.0g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮+2.0mg.L^-1 6-卞氨基嘌呤+0.1mg.L^-1噻苯隆+0.2mg.L^-1萘乙酸；

(5)叢生芽繼代增殖培養：將高度1.0cm以下叢生芽分割成帶愈傷組織小塊的單株后接種到繼代增殖培養基上，培養20天后，可產生5個以上叢生芽；基本培養基配方：+1.0g.L^-1活性炭+1.0g.L^-1聚乙烯吡咯烷酮+2.0mg.L^-16-卞氨基嘌呤+0.5mg.L^-1萘乙酸；

(6)生根誘導培養：將繼代增殖形成的叢生芽分割成單株后接種到生根培養基上，培養20天后開始產生根系；基本培養基配方：+500mg.L^-1花寶1號+1.0g.L^-1活性炭+1.2mg.L^-1吲哚丁酸+0.1mg.L^-1 6-卞氨基嘌呤；

(7)瓶苗移栽：將瓶苗進行煉苗培養；同時將基質處理后裝入營養袋中；將煉苗后的瓶苗取出，洗凈根系后置于有少量水分的磁盤中，將幼苗植入已消毒裝袋的基質中，每袋1株；將植苗營養袋挨個放入泥底苗床中，然后澆透水，搭棚遮陰，完成幼苗移栽；

所述幼苗移栽包括以下技術：①基質處理：將蛭石+砂質黃壤按照體積比為1∶2混合的基質，用3000mg.L^-1的多菌靈水溶液消毒處理后裝入5cm×8cm的營養袋中；②將煉苗后的瓶苗取出，用水清洗凈根系，置于有少量水分的磁盤中，將幼苗植入已消毒裝袋的基質中，每袋1株；③將植苗營養袋挨個放入寬度1m，深度0.2cm的泥底苗床中，然后澆透水；在苗床上搭0.5m高小拱棚遮陰，上覆白色地膜和遮陰率50％遮陽網。

2.根據權利要求1所述栝樓嫩葉的組培育苗方法，其特征在于方法的第(7)步中，所述煉苗培養是：將生根培養30d，苗高5～8cm，根系5～10根瓶苗揭開瓶蓋，每瓶加入15ml蒸餾水，帶瓶移入遮蔭率70％的大棚，在環境溫度20℃～30℃的條件下煉苗培養10d。