[發(fā)明專(zhuān)利]靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑及其鑒定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810191281.1
• 申請(qǐng)日: 2018-03-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108341874A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁欣;劉建文;亓瑩雪
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/28
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577;C12Q1/02
• 代理公司: 上海智信專(zhuān)利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔;鄭暄

本發(fā)明涉及一種靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑，所述的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑為單克隆抗體1D12或2B4。本發(fā)明還涉及一種用于鑒定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑的方法。本發(fā)明中通過(guò)建立的靶向血小板膜蛋白GPIbα腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑的驗(yàn)證模型驗(yàn)證其靶向性及功能性，通過(guò)四個(gè)驗(yàn)證模型的驗(yàn)證，從確定靶向小鼠血小板GPIbα單克隆抗體1D12及2B4可以有效抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移而不影響正常血小板功能。為以后GPIbα在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中具體作用機(jī)制的研究提供可能性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及藥理學(xué)，具體是指一種靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑及其鑒定方法。

背景技術(shù)

血小板能夠促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，其促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的第一步及關(guān)鍵點(diǎn)是腫瘤細(xì)胞激活血小板形成瘤栓。血小板表面的多種粘附分子例如糖蛋白(Glycoprotein，GP)Ib-IX-V、GPIIb-IIIa等相互作用從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與血小板的粘附。其中GPIbα是GPIb-IX-V復(fù)合物中最大也是最重要的組成部分。有研究表明，敲除GPIbα基因或替換GPIbα胞外區(qū)的小鼠模型可顯著減少小鼠肺癌的肺部轉(zhuǎn)移，但會(huì)并發(fā)血小板減少癥(Jain S,Zuka M,Liu J,etal.Proc Natl Acad Sci U S A,2007,104(21))。另有研究表明，抗GPIIb/IIIa單克隆抗體可以有效阻斷血小板與腫瘤細(xì)胞的粘附和聚集，但存在潛在的出血并發(fā)癥也限制了這類(lèi)單克隆抗體的應(yīng)用(Amirkhosravi A,Mousa SA,Amaya M,et al.Thromb Haemost,2003,90(3):549-554))。因此，確立以GPIbα為靶點(diǎn)，篩選出靶向GPIbα抑制腫瘤轉(zhuǎn)移而不影響血小板數(shù)量及功能的抗體藥物，可能為腫瘤轉(zhuǎn)移帶來(lái)新的治療方法。

在以往的的研究中，已有部分靶向人源血小板GPIbα的單克隆抗體被發(fā)現(xiàn)。例如SZ2(Oleksowicz L,Mrowiec Z,Schwartz E,et al.Thrombosis Research.1995；79(3):261)，AK2(Ward CM,Andrews RK,Smith AI,et al.Biochemistry.1996；35(15):4929-4938)等單克隆抗體。然而對(duì)于靶向血小板GPIbα單克隆抗體在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中作用的研究鮮有發(fā)表，并且對(duì)于GPIbα在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用還并不明確。因此，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的靶向血小板GPIbα單克隆抗體的發(fā)現(xiàn)對(duì)于GPIbα抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服上述缺陷和不足，提供了一種通過(guò)建立的靶向血小板膜蛋白GPIbα腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑的鑒定模型驗(yàn)證其靶向性及功能性、確定靶向小鼠血小板GPIbα單克隆抗體1D12及2B4、有效抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移而不影響正常血小板功能的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑及其鑒定方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，在本發(fā)明一方面提供了一種靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑，其主要特點(diǎn)是，所述的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑為單克隆抗體1D12或2B4。

本發(fā)明另一方面提供了一種用于鑒定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑的方法，其主要特點(diǎn)是，所述的方法包括：

第一鑒定模型，利用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，檢測(cè)樣品對(duì)血小板GPIb-IX復(fù)合物的結(jié)合能力；

第二鑒定模型，利用免疫印跡法，檢測(cè)樣品在血小板膜上的具體結(jié)合位置；

第三鑒定模型，利用連續(xù)光譜熒光儀，檢測(cè)樣品對(duì)血小板與腫瘤細(xì)胞的粘附作用，以鑒定樣品對(duì)血小板與腫瘤細(xì)胞粘附的抑制作用；

第四鑒定模型，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板活性蛋白的表達(dá)，以檢測(cè)樣品對(duì)血小板活性及功能的影響。

較佳的，所述的第一鑒定模型具體包括：