[發明專利]靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑及其鑒定方法在審
| 申請號： | 201810191281.1 | 申請日： | 2018-03-08 |
| 公開（公告）號： | CN108341874A | 公開（公告）日： | 2018-07-31 |
| 發明（設計）人： | 梁欣;劉建文;亓瑩雪 | 申請（專利權）人： | 華東理工大學 |
| 主分類號： | C07K16/28 | 分類號： | C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海智信專利代理有限公司 31002 | 代理人： | 王潔;鄭暄 |
| 地址： | 200237 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 腫瘤轉移抑制劑 靶向 小鼠 血小板膜糖蛋白 單克隆抗體 驗證 血小板膜蛋白 有效抑制腫瘤 腫瘤轉移過程 正常血小板 血小板 模型驗證 細胞轉移 作用機制 靶向性 研究 | ||
1.一種靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑，其特征在于，所述的腫瘤轉移抑制劑為單克隆抗體1D12或2B4。
2.一種用于鑒定權利要求1中所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑的方法，其特征在于，所述的方法包括：
第一鑒定模型，利用酶聯免疫吸附技術，檢測樣品對血小板GPIb-IX復合物的結合能力；
第二鑒定模型，利用免疫印跡法，檢測樣品在血小板膜上的具體結合位置；
第三鑒定模型，利用連續光譜熒光儀，檢測樣品對血小板與腫瘤細胞的粘附作用，以鑒定樣品對血小板與腫瘤細胞粘附的抑制作用；
第四鑒定模型，利用流式細胞術檢測血小板活性蛋白的表達，以檢測樣品對血小板活性及功能的影響。
3.根據權利要求2中所述的用于鑒定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑的方法，其特征在于，所述的第一鑒定模型具體包括：
采用ELISA技術，依照雙抗體夾心法原理，首先將靶向血小板膜糖蛋白GPIX的單克隆抗體吸附于酶標板上，加入微量血小板裂解液，使其抓取其中的GPIb-IX復合物，之后加入樣品，使靶向GPIb-IX復合物的樣品結合，最后加入酶標記抗體后顯色，最終通過酶標儀讀取OD值。
4.根據權利要求2中所述的用于鑒定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑的方法，其特征在于，所述的第二鑒定模型通過最終條帶位置確定樣品與血小板裂解液的結合位置，以證明樣品靶向GPIbα。
5.根據權利要求2中所述的用于鑒定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑的方法，其特征在于，所述的第三鑒定模型中的腫瘤細胞為小鼠LLC細胞，并且所述的腫瘤細胞經缺氧24小時復氧2～4小時培養活化后與熒光染料標記的血小板共孵育。
6.根據權利要求2中所述的用于鑒定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的腫瘤轉移抑制劑的方法，其特征在于，所述的第四鑒定模型中的血小板活性檢測為對血小板活性蛋白P-selectin表達的檢測。
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