[發明專利]一種紅耳龜特異性引物及其應用在審
| 申請號： | 201810190950.3 | 申請日： | 2018-03-08 |
| 公開（公告）號： | CN108315434A | 公開（公告）日： | 2018-07-24 |
| 發明（設計）人： | 龔世平;萬小娟;李偉業;葛研;魏玉峰 | 申請（專利權）人： | 廣東省生物資源應用研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001 | 代理人： | 郝文婷;劉明星 |
| 地址： | 510260 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 特異性引物 野外 核苷酸序列 電泳檢測 技術支持 快速識別 實驗儀器 外來入侵 有效分子 有效手段 環境DNA 快速區 耗材 可用 條帶 應用 物種 檢測 調查 發現 | ||
1.一種紅耳龜特異性引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示。
2.權利要求1所述紅耳龜特異性引物在快速區分紅耳龜與其它11種在中國野外有發現的龜類中的應用。
3.根據權利要求21所述的應用，其特征在于，所述其它11種在中國野外有發現的龜類包括：烏龜Mauremys reevesii、花龜Mauremys sinensis、黃喉擬水龜Mauremys mutica、安布閉殼龜Cuora amboinensis、大鱷龜Macroclemys temminckii、蛇鱷龜Chelydraserpentina、平胸龜Platysternon megacephalum、中華鱉Pelodiscus sinensis、山瑞鱉Palea steindachneri、亞洲鱉Amyda cartilaginea、佛羅里達鱉Apaloneferox。
4.一種快速區分紅耳龜與其它11種龜類的方法，其特征在于，將紅耳龜特異性引物用于PCR反應并進行電泳檢測，通過所得目的條帶的有無，快速區分紅耳龜與其它11種龜類；
所述紅耳龜特異性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示。
5.根據權利要求4所述的快速區分紅耳龜與其它11種龜類的方法，其特征在于，所述PCR的反應體系為：25μL，模板DNA2.0μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，紅耳龜特異性引物各1.0μL，ddH2O 8.5μL。
6.根據權利要求4所述的快速區分紅耳龜與其它11種龜類的方法，其特征在于，所述PCR的反應條件為：①94℃4min；②94℃30s、57℃30s和72℃30s，共35個循環；③72℃延伸10min。
7.根據權利要求4所述的快速區分紅耳龜與其它11種龜類的方法，其特征在于，所述電泳條件為140V，35min。
8.根據權利要求4所述的快速區分紅耳龜與其它11種龜類的方法，其特征在于，所述其它11種龜類包括：烏龜Mauremys reevesii、花龜Mauremys sinensis、黃喉擬水龜Mauremysmutica、安布閉殼龜Cuora amboinensis、大鱷龜Macroclemys temminckii、蛇鱷龜Chelydra serpentina、平胸龜Platysternon megacephalum、中華鱉Pelodiscussinensis、山瑞鱉Palea steindachneri、亞洲鱉Amyda cartilaginea、佛羅里達鱉Apaloneferox。
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