[發(fā)明專利]一種改造CHO-lec2細胞提高抗體糖鏈中半乳糖含量的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810190466.0
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN110241134A
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜標(biāo);吳鵬;任培玲
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海高等研究院;中國科學(xué)院大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/13;C12N15/54
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

1.一種表達抗體的方法，包括如下步驟：

(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒：將GT基因插入第一表達載體中，構(gòu)建GT重組質(zhì)粒，將抗體重鏈編碼基因插入到第二表達載體中，構(gòu)建抗體重鏈重組質(zhì)粒，將抗體輕鏈編碼基因插入到第三表達載體中，構(gòu)建抗體輕鏈重組質(zhì)粒；

(2)將步驟(1)所獲得的GT重組質(zhì)粒、抗體重鏈重組質(zhì)粒及抗體輕鏈重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至CHO-lec2細胞中，進行抗體表達，在表達產(chǎn)物中分離獲得抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，所述GT基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(1)中，還包括以下特征中的任一項或多項：(1)所述第一表達載體選自pcDNA3.1(+)(Ampicillin)、pVAX、pCMV、pGL、pMZ；(2)所述第二表達載體選自pLONZA、pcDNA、pVAX、pCMV、pGL、pMZ；(3)所述第三表達載體選自pLONZA、pcDNA、pVAX、pCMV、pGL、pMZ。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(1)中，還包括以下特征中的任一項或多項：(1)所述GT基因插入到第一表達載體中的限制性酶切位點之間；(2)所述抗體重鏈編碼基因插入到第二表達載體中的限制性酶切位點之間；(3)所述抗體輕鏈編碼基因插入到第三表達載體中的限制性酶切位點之間。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(1)中，還包括以下特征中的任一項或多項：(1)所述GT基因插入到第一表達載體中的HindIII酶和XhoI酶的限制性酶切位點之間；(2)所述抗體重鏈編碼基因插入到第二表達載體中的BamH I和EcoRI的限制性酶切位點之間；(3)所述抗體輕鏈編碼基因插入到第三表達載體中的限制性酶切位點之間。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(1)中，具體為：GT基因通過酶切、連接的方法插入到第一表達載體，第一連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，篩選正確連接的載體作為構(gòu)建成功的GT重組質(zhì)粒；抗體重鏈編碼基因通過酶切、連接的方法插入到第二表達載體，第二連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，篩選正確連接的載體作為構(gòu)建成功的抗體重鏈重組質(zhì)粒；抗體輕鏈編碼基因通過酶切、連接的方法插入到第三表達載體，第三連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，篩選正確連接的載體作為構(gòu)建成功的抗體輕鏈重組質(zhì)粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(2)中，GT重組質(zhì)粒、抗體重鏈重組質(zhì)粒及抗體輕鏈重組質(zhì)粒之間的質(zhì)量比例范圍是(2-5)：(50)：(50)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(2)中，所述GT重組質(zhì)粒、抗體重鏈重組質(zhì)粒及抗體輕鏈重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至貼壁狀態(tài)的CHO-lec2細胞中。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，步驟(2)中，共轉(zhuǎn)染時，所使用的轉(zhuǎn)染工具為Freestyle MAX轉(zhuǎn)染試劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體表達方法，其特征在于，所述抗體是IgG抗體。

11.如權(quán)利要求1～10任一項所述抗體表達方法在提高抗體的半乳糖含量中的用途。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，所述抗體表達方法用于提高抗體糖鏈中半乳糖含量。

13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，抗體表達方法用于提高抗體糖鏈中G1F型半乳糖含量和/或G2F型半乳糖含量。

14.一種提高抗體的糖鏈中半乳糖含量的方法，步驟中包括如權(quán)利要求1～10任一項所述抗體表達方法中的步驟(1)和(2)。