[發明專利]蠶蛹蛋白多肽的制備方法

有效

• 申請號: 201810189548.3
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN108396049B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 陳貴才;王賢玉;徐天華;吳中華;張麗佳;聶月美;劉柳;曹春華;周曉紅;張小朋;余有龍
• 申請（專利權）人: 浙江匯能生物股份有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/16;C07K1/18
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 李笑磊

本發明公開了蠶蛹蛋白多肽的制備方法，該制備方法的具體步驟為：向蠶蛹粉中加入正己烷和石油醚混合液，加熱回流得蠶蛹蛋白；將蠶蛹蛋白酶解產物溶于雙蒸水中，離心后上清液即為蠶蛹蛋白多肽粗液；向蠶蛹蛋白粉中加入蒸餾水，混合均勻，調節pH，然后加入堿性蛋白酶和中性蛋白酶，酶解，滅酶，離心，上清液濃縮，即為蠶蛹蛋白多肽粗液；將蠶蛹蛋白多肽粗液經離子交換樹脂層析柱，凝膠柱層析和高效液相色譜進行分離純化，即得蠶蛹蛋白多肽。有益效果為：本發明蛋蠶蛹白多肽的制備方法簡單可行，蛋白多肽得率高、損失低、純度高、活性不被破壞，得到的蛋白多肽對ACE抑制活性好。

技術領域

本發明涉及多肽提取技術領域，尤其是涉及蠶蛹蛋白多肽的制備方法。

背景技術

中國是著名絲綢古國，“絲綢之路”聞名與此，自古以來蠶桑業在中國的農業中都是重要的部分，遠在七千多年前我國就有養蠶抽絲的記載。目前，世界80%的產絲量都是由我國產出。蠶蛹蛋白是一種優質蛋白資源，蛋白質的含量在干蠶蛹中高達50%左右，富含豐富的氨基酸，其中8種必需氨基酸占到總量45%左右，而必需氨基酸和非必需氨基酸是合理的，平衡的，其質量比為0.73，符合世界衛生組織/聯合國糧食及農業組織（WHO/FAO）提出的參考蛋白模式，所以蠶蛹蛋白具有十分高的營養價值。我國是一個養蠶大國，平均每年新鮮蠶蛹的產量可達50萬噸，蠶蛹中的蛋白比很多畜禽類的必需氨基酸含量高，其中富含具有可以促進生長發育、提高免疫力以及補充生物機體營養等功能的很多營養物質，具有巨大的市場潛力。但是由于我國長期以來對蠶蛹方面的加工利用率低下，除了干蠶蛹粉碎后應用于畜禽飼料和營養源添加外，甚至有些蠶蛹被當做肥料或者直接廢棄掉，因此，造成了巨大的資源浪費。

隨著社會的技術和桑蠶生產的增加，蠶蛹和深入的研究和開發的綜合利用已成為必須解決的問題。隨著科技的發展，人們對蠶蛹蛋白的研究將更加多樣化，將不斷的開發出蠶蛹蛋白在食品（例如酸性飲料、肽類保健品、蠶蛹生抽等）、醫藥、化工、農業等行業更多應用，滲透到各個領域中，為綜合利用蠶蛹、發展桑業，為國家GDP的增長貢獻出一份力量。其中以蠶蛹蛋白粉為原料，采用酶解方法制備的蠶蛹蛋白多肽為蠶蛹蛋白的進一步利用提供了一個方向。

現有技術如授權公告號為CN 103520078 B的中國發明專利，公開了蠶蛹多肽及其制備方法、應用，多肽2的制備方法，其步驟包括（1）煎煮，（2）酶解，（3）蛋白質分離，（4）半制備RP-HPLC分離純化，（5）凍干。上述酶解采用中性蛋白酶、復合蛋白酶酶解。上述蛋白質分離采用大孔樹脂、葡聚糖凝膠。上述蠶蛹多肽2是從蠶蛹中提取多肽，安全性好，而且能有效的預防或治療糖尿病。但是該蠶蛹多肽2的分離提純效果不好。

發明內容

本發明的目的在于提供一種制備方法簡單可行，可快速高效地分離出蛋白多肽，蛋白多肽得率高、損失低、純度高、活性不被破壞，得到的蛋白多肽對ACE抑制活性好的蠶蛹蛋白多肽的制備方法。

本發明針對上述技術中提到的問題，采取的技術方案為：

蠶蛹蛋白多肽的制備方法，包括蠶蛹粉預處理、蠶蛹蛋白粉酶解、蠶蛹蛋白多肽粗液制備、離子交換樹脂層析、凝膠柱層析、高效液相色譜純化，其具體步驟為：

蠶蛹粉預處理：按料液比為1:5-8（g/mL）向蠶蛹粉中加入體積比為1:1-2的正己烷和石油醚混合液，加熱回流4-5h，即得蠶蛹蛋白，備用，由于蠶蛹中油脂類的存在，大大降低酶解蠶蛹蛋白的效果，同時還會在酶解液中進行氧化，產生不良的風味和加深酶解液的顏色；此外，由于還因乳化的作用，造成在后期過濾、澄清酶解液時帶來很大的困難，所以必須首先對蠶蛹進行脫脂處理，該步驟處理方法成本低，脫脂效果好；