[發(fā)明專利]一種八月瓜莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810188629.1
• 申請(qǐng)日: 2018-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN108184672B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李安定;席培宇;彭熙;張麗敏;蔡國(guó)俊;張建利;龍秀琴;王濟(jì)紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州省山地資源研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 貴陽(yáng)中工知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 52106
• 代理人: 劉安寧

一種八月瓜莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，包括外植體抗褐化、消毒、腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代增殖培養(yǎng)等技術(shù)環(huán)節(jié)，方法是以剛萌發(fā)7～15天的帶腋芽幼嫩莖段為外植體，用抗氧化劑維生素C浸泡、再用高錳酸鉀水溶液浸泡消毒的外植體改良消毒處理方式，來顯著降低外植體的褐化率和污染率，使外植體初誘導(dǎo)接種成活率達(dá)90%。通過在1/2MS培養(yǎng)基中添加1.5g.L^?1活性炭和2.0 g.L^?1聚乙烯吡咯烷酮，結(jié)合不同階段篩選出的激素配方，能使愈傷組織誘導(dǎo)分化率達(dá)90%以上，能同時(shí)繼代增殖培養(yǎng)愈傷組織和叢生芽，增殖系數(shù)3.0以上。該方法可為利用愈傷組織培養(yǎng)開展新品種誘變培育和良種快速育苗利用提供技術(shù)參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及作物的栽培，進(jìn)一步而言，涉及八月瓜莖段的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

八月瓜是木通科木通屬植物三葉木通(Holboetllia latifolia)的俗稱，多年生落葉木質(zhì)藤本，廣泛分布于我國(guó)貴州、江西、浙江、湖南、四川、湖北等省。果實(shí)為漿果，紫褐色，長(zhǎng)圓筒形。果肉乳白，多汁，味甜，濃香，滑嫩，風(fēng)味獨(dú)特，富含糖類、不飽和脂肪酸、多種維生素、礦物質(zhì)和微量元素以及纈氨酸、蛋氨酸等12種人體不能合成的必需氨基酸。其藤莖作為傳統(tǒng)中藥材具有解毒、利尿、除濕、通經(jīng)、鎮(zhèn)痛、排膿等藥效，對(duì)治療勞傷咳嗽、跌打骨折、水腫、燙傷、淋巴結(jié)核、尿管結(jié)石等病癥有明顯效果；其花期較長(zhǎng)，香氣濃郁，果形奇特美觀，極具觀賞價(jià)值。已與獼猴桃并稱野生水果大王，已成為川湘黔山區(qū)開發(fā)種植的新興水果。果實(shí)種子過多、可食率低是嚴(yán)重制約該特色水果躋身大宗水果的致命傷。

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)是開展八月瓜新品種誘變培育，篩選無籽或少籽新品種，提高可食率等新技術(shù)育種研究的技術(shù)基礎(chǔ)。當(dāng)前八月瓜種苗繁殖主要以種子繁殖、分根繁殖和壓條繁殖為主，組培繁殖技術(shù)研究報(bào)道較少。黎世齡等(2008)用MS基本培養(yǎng)基對(duì)八月瓜胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)研究，發(fā)現(xiàn)八月瓜胚乳培養(yǎng)褐變現(xiàn)象嚴(yán)重，所有培養(yǎng)基中均出現(xiàn)褐變，褐變率最高達(dá)100％，最低10.2％，認(rèn)為控制褐變是八月瓜胚乳培養(yǎng)中確保胚乳活力的重要手段。利用莖段開展愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的研究，目前未見報(bào)道。

關(guān)于八月瓜的種植技術(shù)，中國(guó)專利數(shù)據(jù)庫(kù)中有一些申請(qǐng)件，例如：2015106714315號(hào)《一種八月瓜扦插方法》、2015105412341號(hào)《一種鹽堿地上套種八月瓜和野地瓜的方法》、2016111636363號(hào)《針氈式植物輸液器及八月瓜的硒富集栽培方法》、2017105134383號(hào)《一種八月瓜的栽培方法》、2017107609052號(hào)《一種八月瓜的扦插種植方法》等。迄今為止，尚無八月瓜組織培養(yǎng)的專利申請(qǐng)件。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種能顯著降低外植體褐化的八月瓜莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，為開展誘變育種和快繁育苗技術(shù)研究奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

發(fā)明人提供的八月瓜莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，包含以下步驟：

(1)外植體消毒：采集剛萌發(fā)7～15d的八月瓜新梢，去掉葉片，取帶腋芽莖段做外植體；沖洗干凈后，用5000mg.L^-1維生素C蒸餾水溶液浸泡50min，然后用3000mg.L^-1高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3～5次，再用1000mg.L^-1氯化汞水溶液消毒10min，蒸餾水沖洗5次；

(2)植物細(xì)胞組織培養(yǎng)各階段的基本培養(yǎng)基均為：1/2MS+12g.L^-1瓊脂+30g.L^-1蔗糖+1.5g.L^-1AC(活性炭)+2.0g.L^-1PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，pH值6.5；各階段培養(yǎng)條件為：溫度24℃～26℃，光照為1500～2000Lux，光照時(shí)間為12～14h/d。

(3)腋芽初誘導(dǎo)培養(yǎng)：將消毒后的外植體按生長(zhǎng)極性豎立接種在基本培養(yǎng)基+0.8mg.L^-1KT(6糠氨基嘌呤)+0.005mg.L^-1NAA(萘乙酸)的腋芽初誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。