[發明專利]一種用于酶聯免疫試劑盒的組合物以及糖尿病抗體譜檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201810188203.6
• 申請日: 2018-03-07
• 公開（公告）號: CN108469519B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 張大準;張永頂;馬偉民;王洪濤;馬新民
• 申請（專利權）人: 深圳市伯勞特生物制品有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/68
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 王仲凱

1.一種糖尿病抗體譜檢測試劑盒，其特征在于，包括以下組分：

包被有糖尿病自身抗原的蛋白芯片、用酶標稀釋液稀釋的酶標抗體、樣品稀釋液、洗滌液和顯色液；其中，所述蛋白芯片包被糖尿病自身抗原后采用封閉液封閉，所述封閉液含有1％BSA的磷酸氫二鈉溶液，其中添加了0.8％甘露醇，1％的PVA2W、0.05％的疊氮鈉防腐劑，pH值為7.4，余量為水，所述酶標稀釋液含有100mM的Tris、50mM的檸檬酸、2.5％的BSA、2％的PEG1W、0.01％的阿拉伯樹膠、1％的甜菜堿、以及0.05％的Proclin300，余量為水；

所述包被通過親和素化的蛋白芯片與生物素化的糖尿病自身抗原相互結合包被；

所述生物素化的糖尿病自身抗原包含生物素化的胰島素，其生物素化過程如下：

準備2mg/mL的胰島素PBS溶液，配置濃度約為50mmol/L的S-乙酰硫基乙酸琥珀酰亞胺酯的二甲基亞砜溶液，即A溶液，將10微升的A溶液加入到1毫升的胰島素PBS溶液中混勻室溫反應1小時，反應產物在PBS中透析3次后回收得到insulin-SH-P,4度暫存備用；

以PBS為溶劑配置0.5mol/L的鹽酸羥胺，其含20mmol/L的EDTA，pH7.0，作為B溶液，在上述1mL的insulin-SH-P中加入100微升的B溶液，混合室溫反應1小時，脫鹽柱脫鹽純化得到insulin-SH；

準備10mg/mL的人血白蛋白的PBS溶液，配置10mg/mL的Sulfo-N-琥珀酰亞胺基4-(馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸鈉鹽的PBS溶液作C溶液，另配置濃度為0.25mol/L琥珀酸亞酰胺-十二聚乙二醇-生物素的二甲基亞砜溶液作D溶液，將C溶液與D溶液按1：1比例混合后取20微升加入到1mL10mg/mL的人血白蛋白PBS溶液中混勻室溫反應1小時，用PBS透析3次純化得到Biotin-HBA-SMCC；

將上述純化的insulin-SH與Biotin-HBA-SMCC按體積比10:1混合室溫反應30分鐘后得到Biotin-大分子蛋白-Insulin，具備式1結構，作為生物素化的insulin抗原；

其中，圓形表示胰島素，1≤x≤n，n表示胰島素上氨基的數目，x和n均為整數；橢圓代表大分子蛋白，y+z≤m，z≥10，y≥1，m表示大分子蛋白上的氨基數目，y、z和m均為整數，若z/x為非整數，則z/x取整數且在整數位上加1。

2.根據權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述糖尿病自身抗原采用CB緩沖液或Tris緩沖液為抗原稀釋緩沖液進行包被。

3.根據權利要求1或2所述試劑盒，其特征在于，所述蛋白芯片還包括陰性質控點、陽性質控點、樣品質控點、酶標質控點、參考曲線點以及位置參考點中的一個或兩個以上。

4.權利要求1所述試劑盒的制備方法，其特征在于，包括：

將糖尿病自身抗原在蛋白芯片上進行包被，包被后洗滌，然后加入封閉液封閉，獲得包被有糖尿病自身抗原的蛋白芯片，所述封閉液含有1％BSA的磷酸氫二鈉溶液，其中添加了0.8％甘露醇，1％的PVA2W、0.05％的疊氮鈉防腐劑，pH值為7.4，余量為水；

配制含有100mM的Tris、50mM的檸檬酸、2.5％的BSA、2％的PEG1W、0.01％的阿拉伯樹膠、1％的甜菜堿、以及0.05％的Proclin300，余量為水的酶標稀釋液并稀釋酶標抗體，獲得用酶標稀釋液稀釋的酶標抗體，然后配制樣品稀釋液、洗滌液和顯色液，獲得糖尿病抗體譜檢測試劑盒。