[發(fā)明專利]一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810186175.4
• 申請(qǐng)日: 2018-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN108401902B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜穎;孫宇峰;潘冬梅;韓喜財(cái);夏尊民;宋淑敏;肖宇;韓承偉;王曉楠;趙越;曹焜;魏聯(lián)會(huì);高媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江省科學(xué)院大慶分院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23209
• 代理人: 榮玲

一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它屬于植物的人工栽培技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明包括種子消毒、發(fā)芽培養(yǎng)、再生培養(yǎng)、生根培養(yǎng)，再生培養(yǎng)含激素的MS培養(yǎng)基，蔗糖25～30g/L，瓊脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)20～30天；生根培養(yǎng)含激素的MS培養(yǎng)基或含激素的1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH 5.8，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為20天。本發(fā)明利用莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖得到再生植株，實(shí)驗(yàn)周期短。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物的人工栽培技術(shù)領(lǐng)域；具體涉及一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)

大麻(Cannabis Sativa L.)，是大麻科(Cannabinaceae)大麻屬(Cannabis)一年生草本植物。大麻是世界也是中國最古老、歷史最悠久的栽培作物之一，大麻渾身是寶，可從農(nóng)業(yè)種植延伸到紡織、服裝、造紙、軍需、化工、新型建材、生物能源、食品保健、醫(yī)藥、飼料等十幾個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈。

由于大麻中含有一種致幻成癮的活性成分—四氫大麻酚(THC)，易被不法分子用來非法生產(chǎn)毒品，造成社會(huì)危害，許多國家把大麻也一并列為禁種作物，導(dǎo)致許多珍貴的種質(zhì)資源遺失，對(duì)大麻的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他經(jīng)濟(jì)作物。大麻有雌雄異株和雌雄同株之分，但由于同一群體內(nèi)不同個(gè)體間表現(xiàn)多樣性，種質(zhì)雜合度高，遺傳背景非常復(fù)雜且遺傳學(xué)與分子生物學(xué)的基礎(chǔ)研究也比較少，通過引種、系選、雜交、雜種優(yōu)勢、誘變等方法存在周期長、田間選擇難度大、抗源不足等問題。為了加速育種工作，許多研究者也利用溫室進(jìn)行育種，但由于光照不足、苗期溫度過高等條件的影響，導(dǎo)致大麻幼苗徒長而出現(xiàn)倒伏死亡現(xiàn)象的發(fā)生，這也會(huì)給育種工作帶來困難。生物技術(shù)是解決這些問題的有效途徑，即可加速種質(zhì)資源改良進(jìn)程，穩(wěn)定優(yōu)良性狀，又可解決溫室育種的弊端。

在以往大麻再生體系的研究中，整個(gè)再生過程周期較長。申請(qǐng)?zhí)枮?00610088353.7的中國專利，將種子消毒后接種于發(fā)芽培養(yǎng)基，30天后才將莖尖接種到側(cè)芽培養(yǎng)基中，40天后獲得側(cè)芽，生根培養(yǎng)需要60天，培養(yǎng)周期長。選用種子消毒后接種培養(yǎng)基產(chǎn)生的無菌苗的下胚軸為外植體，從種子接種到生根獲得新的植株需要100多天的時(shí)間，影響實(shí)驗(yàn)周期的緊密性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：

步驟1、種子消毒：挑選成熟、飽滿、有光澤的大麻種子，先用洗滌液洗滌后用自來水沖洗，再在超凈臺(tái)中用濃度為75％的乙醇浸泡，然后用無菌水沖洗，再用0.1％的升汞溶液浸泡，然后用無菌水沖洗至水體澄清，用無菌濾紙吸干種子表面水分，得到消毒后的大麻種子；

步驟2、發(fā)芽培養(yǎng)：將步驟1消毒后的大麻種子接種于如下發(fā)芽培養(yǎng)基中，MS培養(yǎng)基，蔗糖25～30g/L，瓊脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)8～10天，得到大麻無菌苗莖尖；

步驟3、再生培養(yǎng)：將步驟2得到的大麻無菌苗莖尖接種到如下的再生培養(yǎng)基中：含激素的MS培養(yǎng)基，蔗糖25～30g/L，瓊脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)15～20天，得到大麻莖尖再生植株；

步驟4、生根培養(yǎng)：將步驟3得到的莖尖再生植株接種到如下的生根培養(yǎng)基中，含激素的MS培養(yǎng)基或含激素的1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH 5.8，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為20～30天，得到生根的植株。