[發(fā)明專利]一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810186175.4
• 申請日: 2018-03-07
• 公開（公告）號: CN108401902B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜穎;孫宇峰;潘冬梅;韓喜財;夏尊民;宋淑敏;肖宇;韓承偉;王曉楠;趙越;曹焜;魏聯(lián)會;高媛
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江省科學(xué)院大慶分院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23209
• 代理人: 榮玲

1.一種大麻莖尖組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟1、種子消毒：挑選成熟、飽滿、有光澤的大麻種子，先用洗滌液洗滌后用自來水沖洗，再在超凈臺中用濃度為75％的乙醇浸泡，然后用無菌水沖洗，再用濃度為0.1％的升汞溶液浸泡，然后用無菌水沖洗至水體澄清，用無菌濾紙吸干種子表面水分，得到消毒后的大麻種子；

步驟2、發(fā)芽培養(yǎng)：將步驟1消毒后的大麻種子接種于如下發(fā)芽培養(yǎng)基中，MS培養(yǎng)基，蔗糖25～30g/L，瓊脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)8～10天，得到大麻無菌苗莖尖；

步驟3、再生培養(yǎng)：將步驟2得到的大麻無菌苗莖尖接種到如下的再生培養(yǎng)基中：含激素的MS培養(yǎng)基，蔗糖25～30g/L，瓊脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)15～20天，得到大麻莖尖再生植株；

步驟4、生根培養(yǎng)：將步驟3得到的大麻莖尖再生植株接種到如下的生根培養(yǎng)基中，含激素的MS培養(yǎng)基或含激素的1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH 5.8，培養(yǎng)溫度為23～25℃，光照強度2300lux，每天16h光照、8h黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20～30天，得到生根的植株；

步驟2中的MS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成份組成，其中所述的大量元素包括1500～1650mg/L的NH₄NO₃、120～170mg/L的KH₂PO₄、1200～1500mg/L的KNO₃、350～400mg/L的CaCl₂·2H₂O、300～350mg/L的MgSO₄·7H₂O，所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂O、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂O，所述的鐵鹽為硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L，所述的有機成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1～0.2mg/L的鹽酸硫胺素、0.5～1.0mg/L的鹽酸吡哆醇、0.5～1.0mg/L的煙酸；

步驟3或4中的含激素的MS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成份、激素組成，其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH₄NO₃、130mg/L的KH₂PO₄、1250mg/L的KNO₃、370mg/L的CaCl₂·2H₂O、330mg/L的MgSO₄·7H₂O，所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂O、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂O，所述的鐵鹽為硫酸亞鐵27.8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L，所述的有機成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的鹽酸硫胺素、0.6mg/L的鹽酸吡哆醇、0.6mg/L的煙酸，激素為1.0mg/L6-芐氨基腺嘌呤、1.0mg/L激動素。