[發明專利]用于鑒定不同亞組瓜類細菌性果斑病菌的PCR引物和方法

有效

• 申請號: 201810183442.2
• 申請日: 2018-03-06
• 公開（公告）號: CN108179207B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 楊玉文;趙廷昌;喬培;張曉曉;白雪;關巍;季葦芹
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

本發明涉及瓜類細菌性果斑病的檢驗檢疫，具體涉及用于鑒定不同亞組瓜類細菌性果斑病菌的PCR引物和方法。本發明提供的用于鑒定不同亞組瓜類細菌性果斑病菌的PCR引物組，包括正向引物BFB和反向引物BFB1、BFB2，其核苷酸序列如下：BFB：5’?ATGAAGCGTACTGTTCAG?3’，BFB1：5’?ACCATCGATATTAGCATC?3’，BFB2：5’?TTAAGGAGCAAACGTGC?3’。

技術領域

本發明涉及瓜類細菌性果斑病的檢驗檢疫，具體涉及用于鑒定不同亞組瓜類細菌性果斑病菌的PCR引物和方法。

背景技術

瓜類細菌性果斑病(Bacterial fruit blotch of melons，BFB)是發生在西瓜、甜瓜等葫蘆科作物上的一種種傳細菌性病害，其病原菌西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli)，為革蘭氏陰性菌(Schaad,N.W.，Postnikova E,Sechler A,et al.Reclassification ofsubspecies of Acidovorax avenae as A.avenae(Manns 1905)emend.,A.cattleyae(Pavarino,1911)comb.nov.,A.citrulli (Schaad et al.,1978)comb.nov.,andproposal of A.oryzaesp.nov.Syst Appl Microbiol,2008,31:434～446)，主要侵染西瓜、甜瓜、南瓜、黃瓜等葫蘆科作物，嚴重威脅了各國西甜瓜產業的發展。自1965年首次在美國報道以來，該病已相繼在世界上許多西瓜、甜瓜產區發生危害，并造成了巨大的經濟損失(Walcott R R，Gitaitis R D.Detection of Acidovorax avenae subsp.citrulli inwatermelon seed using immunomagnetic separation and the polymerase chainreaction.Plant Disease,2000,84:470～474.)。我國在20世紀90年代首次報道該病害，隨后在新疆、海南、內蒙古、北京、山東、吉林、福建和云南等地相繼發生并呈上升趨勢，造成大田西瓜、甜瓜減產甚至絕收，同時嚴重影響了我國的西瓜和甜瓜種業以及嫁接苗的安全生產，給我國的西瓜和甜瓜產業帶來巨大的損失(趙廷昌，孫福在，王兵萬.西瓜細菌性果斑病國內外研究進展.植物保護技術與推廣，2001，3:37～38，36.)。

Somodi等(1991)首次提出西瓜噬酸菌存在多樣性。之后，各國學者分別對世界各地的西瓜噬酸菌菌株的種內遺傳多樣性進行了分析，將所有供試菌株分成了兩個亞組(R.R.Walcott,A.Fessehaie,A.C.Castro.Differences in Pathogenicity between twoGenetically Distinct Groups of Acidovorax avenae subsp.citrulli on CucurbitHosts.Journal of Phytopathology.2004,152(5):277–285；Shasha Yan,Yuwen Yang,Tielin Wang et al.Genetic diversity analysis of Acidovorax citrulli inChina.European Journal of Plant Pathology.2013,136(1)：171–181)。亞組I的菌株主要分離自甜瓜及南瓜等寄主，亞組II的菌株主要分離自西瓜。西瓜噬酸菌兩個亞組的菌株在致病力和抗銅性等方面存在較大差異。亞組I的菌株對硫酸銅的敏感性明顯低于亞組II的菌株(趙文龍，楊玉文，王鐵霖等，瓜類細菌性果斑病菌對硫酸銅的敏感性檢測與分析.植物保護，2013，39(6)：100～105)。因此，快速準確地區分I組和II組菌株在該病害的綜合防治中有著非常重要的意義。

傳統的病害診斷、檢測方法主要是依據病原形態學、生理學和生物化學的特性，不但過程繁瑣、時間周期長，而且準確性差、精度不高。因此，利用分子生物學手段快速、準確地鑒別瓜類細菌性果斑病菌具有重要的理論意義和實用價值。