[發明專利]一種提取檸檬苦素和諾米林的方法

有效

• 申請號: 201810182766.4
• 申請日: 2018-03-06
• 公開（公告）號: CN108642117B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 石清東;王正元;陳赫巖;王姣
• 申請（專利權）人: 北京頤方生物科技有限公司
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C07J73/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明涉及一種提取檸檬苦素和諾米林的方法，包括：將原料脫脂后采用麥曲復合酶液進行酶解；去除上層清液，獲得酶解底料；加入水楊酸鈉溶液進行提取，分離提取液；調pH至4.6～5.0，取上清液上大孔樹脂，先用20～25％的乙醇溶液洗脫去除雜質，再用85～90％的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥，得浸提物A；將所得浸提物A用二氯甲烷和異丙醇混合溶液加熱溶解，過濾去除不溶物，降溫，結晶，獲得檸檬苦素結晶體；將母液減壓蒸干獲得浸提物B，用乙酸乙酯和乙醇混合溶液加熱溶解，過濾去除不溶物，降溫，結晶，獲得諾米林晶體。本發明提取方法成本低，產率及產物純度高，且減少了環境的污染。

技術領域

本發明屬于天然植物中有效成分的提取分離純化技術領域，具體涉及一種提取檸檬苦素和諾米林的方法。

背景技術

檸檬苦素(Limonin)與諾米林(Nomilin)是柑橘中主要的檸檬苦素類化合物，其是三萜類植物的次生代謝產物，主要存在于蕓香科和楝科植物中，尤其在柑橘屬的種子中含量較高。柑橘核中的檸檬苦素類化合物主要包括檸檬苦素類化合物甙元和糖苷，其中甙元類物質主要有檸檬苦素、諾米林、黃柏酮、異黃柏酮酸等，糖苷類物質一般為D環開環加入一個糖基。檸檬苦素，別名：黃柏內酯、吳茱萸內酯，分子式C₂₆H₃₀O₈,分子量470.53，純品為白色、味苦、結晶狀；諾米林，分子式C₂₈H₃₄O₉，分子量514.57，白色粉末，味苦。

隨著檸檬苦素類化合物結構的確定及其生物學功能的闡明，柑橘果實中檸檬苦素類化合物的開發利用呈現出廣闊的市場前景。以前人們對檸檬苦素類化合物的認識是為了將其從柑橘果實中除去，以提高柑橘果汁的商品價值。隨后研究發現檸檬苦素類化合物在促進癌細胞凋亡、抗菌、抗病毒、抗瘧疾、抗炎和昆蟲拒食等方面具有重要生物活性。目前，人們對檸檬苦素類化合物的需求量日益增加，國內外對檸檬苦素類似物的大規模提取分離以及作為功能性食品添加劑的應用研究已經開始；而且可以預測，在不遠的將來檸檬苦素類化合物將有更廣闊的應用前景。

目前，檸檬苦素類化合物的提取分離工藝存在有機溶劑用量大、產率低、純度不高及提取成本高的問題。中國專利CN101531666A公開了一種從柚核中提取檸檬苦素的工藝，記載了以醇類有機溶劑作為提取溶劑，通過層析和結晶得到純度為92％，產率為0.25％的檸檬苦素，檸檬苦素產率和純度均較低，且有機溶劑用量大。中國專利CN101367823A公開了從吳茱萸中分離檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法，其通過有機溶劑萃取、柱層析、高效制備液相分離得到純度為99％的檸檬苦素，該提取工藝存在產率較低的問題，僅為0.1％，且成本太高，目前只適合實驗制備。中國專利CN102153615A公開了一種從桔核中提取活性成分的方法，該工藝采用超濾處理，將濾液進行親和層析，β-葡萄糖酶、糖化酶和α-淀粉酶進行酶解，得到檸檬苦素產率為0.62～0.65％，純度為98～100％，諾米林的產率為0.085～0.11％，純度94～97％。提取方法中仍存在酶解不徹底，成本較高，膜處理難以大規模生產的缺點。中國專利CN103421077A公開了一種從柚類果實中分離純化檸檬苦素類化合物的方法，其采用樹脂初步純化、高速逆流色譜純化、半制備液相色譜分離三個步驟，其采用的都是實驗級別的儀器，難以擴大進行生產。

發明內容

為克服上述檸檬苦素和諾米林提取過程中存在的問題，本發明提供了一種提取檸檬苦素和諾米林的方法，該方法可促進橘核中檸檬苦素和諾米林的溶出，解決了檸檬苦素提取現有工藝中有機溶劑用量大、提取產率低、提取成本高的問題。本發明方法適用于含檸檬苦素和諾米林的原料，例如蕓香科和楝科植物，尤其是柑橘屬植物的種子(例如柑橘核、柚核等)。

本發明技術方案如下：