[發明專利]一種提取檸檬苦素和諾米林的方法

有效

• 申請號: 201810182766.4
• 申請日: 2018-03-06
• 公開（公告）號: CN108642117B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 石清東;王正元;陳赫巖;王姣
• 申請（專利權）人: 北京頤方生物科技有限公司
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C07J73/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種提取檸檬苦素和諾米林的方法，包括：將柑橘屬植物的種子脫脂，獲得預處理料；采用麥曲復合酶液進行酶解；酶解完成后去除上層清液，獲得酶解底料；加入水楊酸鈉溶液進行提取，分離提取液；調pH至4.6～5.0，取上清液上大孔樹脂，先用25～30%的乙醇溶液洗脫去除雜質，再用85～90%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥，得浸提物A；將所得浸提物A用二氯甲烷和異丙醇混合溶液加熱溶解，過濾去除不溶物，降溫，結晶，獲得檸檬苦素結晶體；將去除檸檬苦素的濾液減壓蒸干獲得浸提物B，用乙酸乙酯和乙醇混合溶液加熱溶解，過濾去除不溶物，降溫，結晶，獲得諾米林晶體；

所述麥曲復合酶液的制備方法包括：將麥曲粉碎至80-100目，添加其重量2～3倍的生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，于溫度4～6℃條件下浸提8～12h，過濾，即得麥曲復合酶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解條件：pH為6.0～6.5，溫度為40～45℃。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述水楊酸鈉溶液的濃度為1.5～1.7mol/L；

所述水楊酸鈉溶液與所述酶解底料干重的重量比為6～7:1；

所述水楊酸鈉溶液的提取溫度為52～55℃。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述水楊酸鈉溶液的濃度為1.6mol/L；所述水楊酸鈉溶液與所述酶解底料干重的重量比為6.5:1；所述水楊酸鈉溶液的提取溫度為53℃。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔樹脂為XAD-6型。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述二氯甲烷和異丙醇混合溶液是由二氯甲烷和異丙醇按體積比1:1.8組成；所述二氯甲烷和異丙醇混合溶液與所述浸提物A干重的重量比為11～12:1；和/或，

所述乙酸乙酯和乙醇混合溶液是由乙酸乙酯和乙醇按體積比5:1組成；所述乙酸乙酯和乙醇混合溶液與所述浸提物B干重的重量比為12～14:1。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述柑橘屬植物的種子為柑橘核或柚核。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a）橘核預處理，選取無霉變干燥的橘核，粉碎，過80-100目篩；添加石油醚進行脫脂處理，分離液相，減壓蒸餾，回收溶劑，獲得副產物橘核提取油；將脫脂底料減壓蒸干，獲得脫脂橘核預處理料；

b）麥曲復合酶液制備，取釀酒麥曲，粉碎過篩，添加生理鹽水或磷酸鹽緩沖液浸提，過濾，離心，獲得麥曲復合酶液；其中，麥曲粉碎至80-100目，液料比為2～3L/kg，浸提溫度為4～6℃，時間為8～12h；

c）酶解處理，取上述脫脂橘核預處理料，添加緩沖溶液，并添加麥曲復合酶液進行保溫酶解，完成后去除上層清液，獲得酶解底料；其中，液料比為4～8L/kg，麥曲復合酶液添加量為1～5%，溶液的pH為6.0～6.5，溫度為40～45℃，時間為6～8h；

d）水助溶劑提取，取上述酶解底料添加所述水楊酸鈉溶液，在一定條件下進行提取，分離得提取液；

e）大孔樹脂吸附及洗脫，取上述提取液調節pH后離心，取上清液進行XAD-6型大孔樹脂吸附，先用低濃度乙醇洗脫去除雜質，再用高濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸餾，回收乙醇，干燥，獲得浸提物A；

f）結晶處理，取浸提物A置于40℃條件下干燥，將干燥后的浸膏添加所述二氯甲烷和異丙醇混合溶液進行加熱溶解，過濾去除不溶物，降溫，結晶，獲得檸檬苦素結晶體；將去除檸檬苦素結晶體的濾液減壓蒸干獲得浸提物B，取浸提物B添加乙酸乙酯和乙醇混合溶液進行加熱溶解，過濾去除不溶物，降溫，結晶，所得晶體為諾米林晶體。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟c）中酶解處理條件為：液料比為6～8L/kg，麥曲復合酶液的添加量為2～3%，溶液的pH為6.0～6.5，酶解溫度為42℃，時間為7h。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）橘核預處理：選取無霉變干燥的橘核，粉碎，過80～100目篩，備用；

2）脫脂處理：取上述經粉碎的橘核進行脫脂處理，脫脂條件：脫脂溶劑為沸程為60℃～90℃的石油醚，液料比4～6L/kg，溫度為60℃水浴，時間為5～8h，脫脂后獲得脫脂橘核預處理料；

3）麥曲復合酶液制備：取釀酒麥曲，粉碎，過100目篩；添加pH為6.0～6.5的磷酸鹽緩沖溶液浸提，浸提條件：液料比2～3L/kg，溫度為4～6℃，時間為8～12h；然后將浸提液依次用4層紗布、濾紙過濾，濾液在10000rpm、4℃條件下離心30min，取離心上清液在無菌條件下過孔徑為0.22μm的濾膜，獲得麥曲復合酶液；

4）酶解處理：取上述脫脂橘核預處理料添加所述麥曲復合酶液進行酶解，具體為:添加pH為6.0～6.5的磷酸鹽緩沖溶液或pH為6.0～6.5的生理鹽水，液料比為4～8L/kg，并添加所述麥曲復合酶液，麥曲復合酶液添加量為總體積的1～5%，溶液pH值為6.0～6.5，酶解溫度為40～45℃，攪拌提取6～8h，離心去除上層清液，獲得酶解底料；

5）水助溶劑提?。簩⑸鲜雒附獾琢咸砑?.5～1.7mol/L的水楊酸鈉溶液進行提取，液料比為6～7L/kg，溫度為52～55℃，時間為6～8h；提取過程采用三級四罐式逆流提取方式，提取完成后分離提取液；

6）大孔樹脂吸附解析：用1mol/L鹽酸調節將上述提取液的pH調至4.6～5.0，離心分離沉淀水楊酸；取上清液采用XAD-6型大孔吸附樹脂進行吸附；先用2～4倍柱體積的25～30%的乙醇沖洗去除雜質；再用3～6倍柱體積的85～90%的乙醇進行洗脫大孔樹脂，收集洗脫液，減壓蒸餾，回收乙醇，獲得浸提物A；

7）檸檬苦素結晶：將所述浸提物A在40℃條件下干燥，按液料比為11～12L/kg添加二氯甲烷和異丙醇混合溶液，加熱至40℃，趁熱過濾去除不溶物，降溫，于4℃條件下結晶，所得晶體為檸檬苦素結晶體；將去除檸檬苦素結晶體的濾液減壓蒸干，獲得浸提物B；

8）諾米林結晶：將上述浸提物B，按液料比12～14L/kg的量添加乙酸乙酯和乙醇溶液，加熱至40℃溶解，趁熱過濾去除不溶物，降溫，在4℃條件下結晶，得白色結晶物，所得晶體為諾米林晶體。