[發(fā)明專利]一種活性豬腦多肽的制備方法及其產(chǎn)品

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810182545.7
• 申請(qǐng)日: 2018-03-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109371081A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 聶建群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西康寶醫(yī)藥生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06
• 代理公司: 南昌卓爾精誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 36133
• 代理人: 賀楠

本發(fā)明涉及一種活性豬腦多肽的制備方法，包括將豬腦去除腦膜后，加入磷酸緩沖鹽溶液高速勻漿；再按豬腦質(zhì)量比加入胰蛋白酶水解1?3小時(shí)；再用鹽酸調(diào)pH至6.0，加入Protamex復(fù)合蛋白酶1.6?2.4％，溫度為50℃?70℃水浴4小時(shí)，90?100℃滅活10min；最后離心后取上清即得到活性豬腦多肽。還可以進(jìn)一步將其超濾。按照本發(fā)明所述的制備方法得到活性豬腦多肽，提高了其水解度，增加產(chǎn)量和活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)多肽制備領(lǐng)域，涉及一種活性豬腦多肽的制備方法及其產(chǎn)品。

背景技術(shù)

腦蛋白水解產(chǎn)物活性腦多肽是一種大腦所特有的肽能神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥物，能以多種方式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)節(jié)和改善神經(jīng)元的代謝，促進(jìn)突觸的形成，誘導(dǎo)神經(jīng)元的分化，并進(jìn)一步保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。阿爾茨海默病是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，是老年癡呆癥的一種。臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種精神癥狀和障礙。張道東等采用腦蛋白水解物注射液治療AD患者，對(duì)其療效和安全性進(jìn)行了觀察和評(píng)估。治療3周后在簡(jiǎn)易智力狀態(tài)檢查量(MMSE)評(píng)分、韋氏成人記憶量表(WMS)評(píng)分、日常生活活動(dòng)能力(ADL)及臨床總體療效(CGI)等方面明顯優(yōu)于傳統(tǒng)藥物。結(jié)果表明腦蛋白水解物注射液能迅速改善大腦的血液供應(yīng)，增加腦活性、促進(jìn)有氧代謝，對(duì)AD具有較好的治療作用。近年來(lái)，腦蛋白水解物得到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，對(duì)其化學(xué)成分，藥理作用，臨床療效及生產(chǎn)工藝都有不同的研究成果。

大分子的蛋白質(zhì)可以采用酸水解，堿水解和酶水解等方法進(jìn)行水解，但是酸水解使色氨酸全部破壞，絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸部分被破壞；堿水解可以引起消旋作用，因此大部分采用酶水解的方法。其優(yōu)點(diǎn)在于安全性高，條件溫和，可定位生產(chǎn)特定的肽類，成本低廉。但是不同的酶作用于不同的底物，其制備工藝的具體參數(shù)和步驟都成為限制最后產(chǎn)物的關(guān)鍵因素，因此，本發(fā)明從多角度出發(fā)，探索出一種新的活性豬腦多肽的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種活性豬腦多肽的制備方法及其產(chǎn)品。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1.一種活性豬腦多肽的制備方法，其制備方法包括以下步驟：

1)取豬腦，去除腦膜，加入2-3倍量的磷酸緩沖鹽溶液，然后進(jìn)行勻漿；

2)按豬腦質(zhì)量比加入胰蛋白酶4-6％，溫度37℃-45℃水浴1-3小時(shí)；

3)用鹽酸調(diào)pH至6.0，加入Protamex復(fù)合蛋白酶1.6-2.4％，溫度為50℃-70℃水浴4小時(shí)，滅活；

4)離心后取上清。

進(jìn)一步，所述磷酸緩沖鹽溶液pH8.0-8.5。

進(jìn)一步，所述勻漿為速度10000-16000轉(zhuǎn)/分，每次5min，間隔3-5min，反復(fù)5-7次。

進(jìn)一步，所述滅活為調(diào)pH8，于90-100℃10min；

進(jìn)一步，所述胰蛋白酶加入量為5％。

進(jìn)一步，所述Protamex復(fù)合蛋白酶加入量為2％。

進(jìn)一步，所述步驟4)中離心速率為8000-12000rpm，離心時(shí)間為5-10min。

進(jìn)一步，制備方法還包括步驟5)將步驟4)的上清進(jìn)行超濾。

以上任一項(xiàng)所述的制備方法制備的活性豬腦多肽。

本發(fā)明的有益效果在于：1.在勻漿過(guò)程中用磷酸鹽緩沖液代替?zhèn)鹘y(tǒng)的超純水，充分保證組織在勻漿時(shí)pH的穩(wěn)定，為蛋白的提取時(shí)提供溫和的環(huán)境；2.雙酶的結(jié)合提高水解度，利用2種酶在不同pH才有活性，減少一個(gè)滅活的步驟，對(duì)已經(jīng)水解出的多肽活性減少損失，間接提高水解產(chǎn)物腦多肽的活性。