[發(fā)明專利]一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810182360.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-06
• 公開（公告）號(hào): CN108410833A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張耀洲;吳玉乾;馮建華;李冬梅;張樹軍;陳玉皎;王文雅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市湖濱盤古基因科學(xué)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/12
• 分類號(hào): C12N9/12;C12Q1/6886;C40B40/08;G01N33/573;G01N33/574;G01N33/577
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本發(fā)明涉及一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白及其應(yīng)用，將大量副腫瘤性小腦變性患者、白血病患者作為研究病例，對(duì)病例進(jìn)行基因檢測并分析，確定出人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1的突變蛋白，根據(jù)該人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為副腫瘤性小腦變性、白血病疾病的基因診斷提供指引作用，實(shí)現(xiàn)病癥的診斷與治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基因工程領(lǐng)域，尤其涉及一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

PKN1(Protein Kinase N1，蛋白激酶N1)是一類催化蛋白質(zhì)磷酸化反應(yīng)的酶，分子內(nèi)都存在一個(gè)同源的由約270氨基酸殘基構(gòu)成的催化結(jié)構(gòu)區(qū)。在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控等系統(tǒng)中，蛋白激酶形成了縱橫交錯(cuò)的網(wǎng)絡(luò)。這類酶催化從ATP轉(zhuǎn)移出磷酸并共價(jià)結(jié)合到特定蛋白質(zhì)分子中某些絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基的羥基上，從而改變蛋白質(zhì)、酶的構(gòu)象和活性。

與PKN1相關(guān)的疾病包括副腫瘤性小腦變性、白血病等，且在對(duì)患有副腫瘤性小腦變性、白血病疾病患者的外周血進(jìn)行基因測序過程中，發(fā)現(xiàn)PKN1發(fā)生了突變，因此，對(duì)人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變的檢測對(duì)判斷人體是否患有副腫瘤性小腦變性、白血病疾病具有一定的指引作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白及其應(yīng)用。

本發(fā)明技術(shù)方案包括：

第一方面，提供一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。

第二方面，提供一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1的突變蛋白的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一種基因芯片，包括：固相載體和固定在該載體上的核苷酸探針；所述核苷酸探針根據(jù)所述人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的核苷酸序列，與人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1正常蛋白的核苷酸序列的比對(duì)結(jié)果確定。

優(yōu)選地，所述核苷酸探針為SEQ ID NO:3所示的堿基序列。

第四方面，提供一種特異性識(shí)別人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的單克隆抗體，其編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一種用于檢測人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，所述ELISA試劑盒包括：包被有上述單克隆抗體的ELISA酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、檢測對(duì)象的絲氨酸/蘇氨酸PKN1蛋白、樣品稀釋液、包被緩沖液、ELISA酶標(biāo)板洗滌液、顯色液和終止液。

優(yōu)選地，所述酶標(biāo)二抗為稀釋的HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一種基于上述任一所述ELISA試劑盒檢測人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的抗體的方法，包括：

a、使用所述包被緩沖液對(duì)上述單克隆抗體進(jìn)行稀釋，并將稀釋后的所述單克隆抗體加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，并室溫孵育；

b、使用所述樣品稀釋液將檢測對(duì)象的絲氨酸/蘇氨酸PKN1蛋白稀釋成不同濃度梯度，并將不同濃度梯度的絲氨酸/蘇氨酸PKN1蛋白分別加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，室溫孵育；

c、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

d、加入所述酶標(biāo)二抗，并室溫孵育；

e、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

f、加入所述顯色液，室溫避光孵育，并加入所述終止液終止反應(yīng)；

g、在酶標(biāo)儀上測定波長為450nm處的吸光值。

優(yōu)選地，進(jìn)一步包括：空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)。