[發(fā)明專利]一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810182360.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-06
• 公開（公告）號(hào): CN108410833A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張耀洲;吳玉乾;馮建華;李冬梅;張樹軍;陳玉皎;王文雅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市湖濱盤古基因科學(xué)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/12
• 分類號(hào): C12N9/12;C12Q1/6886;C40B40/08;G01N33/573;G01N33/574;G01N33/577
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1.一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的編碼基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一種基因芯片，其特征在于，包括：固相載體和固定在該載體上的核苷酸探針；所述核苷酸探針根據(jù)所述人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的核苷酸序列，與人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1正常蛋白的核苷酸序列的比對(duì)結(jié)果確定。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因芯片，其特征在于，所述核苷酸探針為SEQ ID NO:3所示的堿基序列。

5.一種特異性識(shí)別人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的單克隆抗體，其特征在于，其編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1所示。

6.一種用于檢測(cè)人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述ELISA試劑盒包括：包被有權(quán)利要求5所述單克隆抗體的ELISA酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、檢測(cè)對(duì)象的絲氨酸/蘇氨酸PKN1蛋白、樣品稀釋液、包被緩沖液、ELISA酶標(biāo)板洗滌液、顯色液和終止液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述用于檢測(cè)人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)二抗為稀釋的HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人IgG。

8.一種基于權(quán)利要求6或7所述ELISA試劑盒檢測(cè)人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的抗體的方法，其特征在于，包括：

a、使用所述包被緩沖液對(duì)權(quán)利要求5所述單克隆抗體進(jìn)行稀釋，并將稀釋后的所述單克隆抗體加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，室溫孵育；

b、使用所述樣品稀釋液將檢測(cè)對(duì)象的絲氨酸/蘇氨酸PKN1蛋白稀釋成不同濃度梯度，并將不同濃度梯度的絲氨酸/蘇氨酸PKN1蛋白分別加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，并室溫孵育；

c、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

d、加入所述酶標(biāo)二抗，并室溫孵育；

e、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

f、加入所述顯色液，室溫避光孵育，并加入所述終止液終止反應(yīng)；

g、在酶標(biāo)儀上測(cè)定波長(zhǎng)為450nm處的吸光值。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述ELISA試劑盒檢測(cè)人的絲氨酸/蘇氨酸PKN1突變蛋白的抗體的方法，其特征在于，進(jìn)一步包括：空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)。