[發明專利]銅綠假單胞菌檢測膜和制備方法及其細菌檢測的方法

在審

• 申請號: 201810178506.X
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108444961A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 魯振坦;王棟;余振國;張佳琪;王躍丹
• 申請（專利權）人: 武漢紡織大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C08J7/12;C08J7/00;C08J5/18;C08L23/06;C08L29/04
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

本發明涉及一種銅綠假單胞菌檢測膜和制備方法及其細菌檢測的方法，屬于生物檢測技術領域。該檢測膜包含基材層，它還包括檢測層，檢測層設置在基材層上，基材層為納米纖維膜組成，檢測層為氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物及苯硼酸聚合物組成，所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物和苯硼酸聚合物通過層層自組裝的方式均勻交替組裝設置在所述納米纖維膜表面。該檢測膜不僅成本低，而且可定量檢測銅綠假單胞菌。

技術領域

本發明涉及銅綠假單胞菌的檢測，屬于生物檢測技術領域，具體地涉及一種銅綠假單胞菌檢測膜和制備方法及其細菌檢測的方法。

背景技術

銅綠假單胞菌原稱綠膿桿菌，廣泛分布于自然界中，是一種常見的條件致病菌，在潮濕的環境下能長期生存，并且對于干燥有較強的抵抗能力。在機體抵抗力降低或者疾病等其他誘發條件下，很容易造成感染和發病，危害較廣。若不幸感染此菌，一般會引起膿腫和敗血癥，嚴重可引起死亡。

銅綠假單胞菌除了可在醫院環境內造成污染，亦常見于水污染中，即使是對于那些通常被認為是非常清潔的水源，也可能存在銅綠假單胞菌。

傳統的致病菌檢測方法中常見的為微生物培養法；近年來隨著免疫學檢測技術的不斷應用，基于免疫學的酶聯免疫吸附和膠體金免疫層析技術得到了發展；近年來新興出現的還有基于PCR技術的檢測方法、基因芯片技術及生物傳感器。這些先進科技的檢驗方法需要專業技術人員進行操作，且機器的成本較高。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明公開了一種成本低且定量檢測銅綠假單胞菌檢測膜和制備方法及其檢測方法。

為實現上述目的，本發明公開了一種銅綠假單胞菌檢測膜，為實現上述目的，包含基材層，它還包括檢測層，所述檢測層設置在所述基材層上，所述基材層為納米纖維膜組成，所述檢測層為氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物及苯硼酸聚合物組成，所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物和苯硼酸聚合物通過層層自組裝的方式均勻交替組裝設置在所述納米纖維膜表面，所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物為半乳糖基化合物或乳糖基化合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物，所述半乳糖基化合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物的分子結構式如下式I所示，所述乳糖基化合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物的分子結構式如下式II所示，具體制備過程為乳糖單體或半乳糖單體與氟硼熒類熒光分子在偶氮二異丁腈的引發下進行自由基聚合反應；

所述苯硼酸聚合物為3-丙烯酰胺基苯硼酸與甲基丙烯酸聚乙二醇酯的共聚物，其分子結構式如下式III所示：

上述式I中的x的數值介于0.9～0.95之間，若糖基分子占比過低會使檢測膜的選擇性下降，同時也可能引起熒光分子的自淬滅帶來檢測精度的降低；糖基分子過高時，熒光分子的占比就會較少，會帶來檢測靈敏度的降低。

同理，式II的n的數值介于0.9～0.95之間，m的數值介于0.05～0.1之間；

上述式III中，m占50～60％，n占40～50％，即m:n＝1:1～3:2，將3-丙烯酰胺基苯硼酸分子與甲基丙烯酸聚乙二醇酯看成為總量為1，在此基礎上，優選，m:n＝1:1.1、m:n＝1:1.2、m:n＝1:1.3、m:n＝1:1.4；其中，式II中的3-丙烯酰胺基苯硼酸分子起到和糖基分子特異性結合的作用，較低的比例無法達到特異性結合作用，同時，3-丙烯酰胺基苯硼酸分子的水溶性較差，和甲基丙烯酸聚乙二醇酯共聚可以通過甲基丙烯酸聚乙二醇酯起到增強溶解度的作用。式III中的m和n在上述比例下既可以達到較好的特異性結合能力，又能保證在水溶液中的溶解和分散能力較好。同時，上述式III中的m和n只是編號，它還可為a、b、c、d等。

進一步地，所述層層自組裝的作用力為靜電吸附作用力，所述納米纖維膜表面通過靜電作用力吸附氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物分子的一端，所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物分子的另一端通過靜電作用力吸附苯硼酸聚合物分子。