[發明專利]銅綠假單胞菌檢測膜和制備方法及其細菌檢測的方法

在審

• 申請號: 201810178506.X
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108444961A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 魯振坦;王棟;余振國;張佳琪;王躍丹
• 申請（專利權）人: 武漢紡織大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C08J7/12;C08J7/00;C08J5/18;C08L23/06;C08L29/04
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種銅綠假單胞菌檢測膜，包含基材層，其特征在于：它還包括檢測層，所述檢測層設置在所述基材層上，所述基材層為納米纖維膜組成，所述檢測層為氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物及苯硼酸聚合物組成，所述納米纖維膜的表面通過靜電作用力依次交替吸附所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物和苯硼酸聚合物若干次，得到銅綠假單胞菌檢測膜；

所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物為半乳糖基聚合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物或乳糖基聚合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物，所述半乳糖基聚合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物的分子結構式如下式I所示，所述乳糖基聚合物和氟硼熒類熒光分子的共聚物的分子結構式如下式II所示，所述苯硼酸聚合物為3-丙烯酰胺基苯硼酸與甲基丙烯酸聚乙二醇酯的共聚物；

2.根據權利要求1所述的銅綠假單胞菌檢測膜，其特征在于：所述式I中，x的數值介于0.9～0.95之間；所述式II中，n的數值介于0.9～0.95之間，m的數值介于0.05～0.1之間。

3.根據權利要求1所述的銅綠假單胞菌檢測膜，其特征在于：所述納米纖維膜的表面吸附所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物的一端，所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物的另一端通過靜電作用力吸附所述苯硼酸聚合物；依次交替吸附所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物和苯硼酸聚合物各5次。

4.根據權利要求1所述的銅綠假單胞菌檢測膜，其特征在于：所述納米纖維膜為聚乙烯-聚乙烯醇納米纖維膜，所述聚乙烯-聚乙烯醇納米纖維膜的厚度為100～300μm，克重為12～40gsm。

5.一種權利要求1所述銅綠假單胞菌檢測膜的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)制備納米纖維膜：在普通無紡布的表面均勻噴淋聚乙烯-聚乙烯醇納米纖維懸浮液，成膜后干燥，分離即制備得到聚乙烯醇-聚乙烯的納米纖維膜；

2)制備表面活化的納米纖維膜：將所述步驟1)制備得到的納米纖維膜浸漬在氫氧化鈉溶液中活化處理得到表面活化的納米纖維膜；

3)制備細菌檢測膜：將所述步驟2)制備得到的表面活化的納米纖維膜浸漬于氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物的水溶液中處理，取出并采用清水洗凈后，再置于苯硼酸聚合物的水溶液中浸漬處理，取出并采用清水洗凈，依次交替重復五次浸漬在氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物的水溶液和苯硼酸聚合物的水溶液中，最后干燥即制備得到細菌檢測膜。

6.根據權利要求5所述銅綠假單胞菌檢測膜的制備方法，其特征在于：所述步驟3)中，所述氟硼熒類熒光分子功能化的糖基聚合物的水溶液濃度為1～4g/L，浸漬處理的時間為10～30min。

7.根據權利要求5所述銅綠假單胞菌檢測膜的制備方法，其特征在于：所述步驟3)中，所述苯硼酸聚合物的水溶液濃度為1～4g/L，浸漬處理的時間為10～30min。

8.根據權利要求5或6或7所述銅綠假單胞菌檢測膜的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，所述氫氧化鈉溶液的濃度為0.5～4.5mol/L，浸漬處理的時間為10～30min。

9.一種檢測銅綠假單胞菌的方法，其特征在于：包括如下步驟：

a)選用權利要求8制備的檢測膜并測定其表面的熒光強度值；

b)取待測樣品滴加到所述步驟a)選用的檢測膜上；

c)測定檢測膜表面的熒光強度變化值，并根據熒光強度變化值計算熒光強度的變化速率；

d)根據所述步驟c)熒光強度的變化速率，結合標準曲線得到待測樣品中的細菌濃度。

10.根據權利要求9所述檢測銅綠假單胞菌的方法，其特征在于：所述步驟d)中標準曲線的繪制過程為：

取五份銅綠假單胞菌懸浮液的濃度為10CFU/mL、10²CFU/mL、10³CFU/mL、10⁴CFU/mL、10⁵CFU/mL的標準溶液，然后取5個完全相同的所述步驟a)的檢測膜并測定其熒光強度值，再分別浸漬于上述標準溶液中，分別在相等的時間間隔之間測定檢測膜表面的熒光強度值，由多個前后變化的熒光強度的差值計算熒光強度的變化速率，以熒光強度的變化速率為縱坐標，以對應的標準溶液濃度的對數值為橫坐標，得到標準曲線。