[發(fā)明專利]一種狂犬病毒顆粒的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810177437.0
• 申請(qǐng)日: 2018-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN108531464B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州瑞貝斯藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/02
• 分類號(hào): C12N7/02
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 許飛;鄭瑩

1.一種用于狂犬病毒顆粒的純化方法，包括將狂犬病毒病毒液進(jìn)行陰離子交換層析和羥基磷灰石層析操作，其中，陰離子交換層析在羥基磷灰石層析之前進(jìn)行；陰離子交換層析和羥基磷灰石層析之間沒有中間層析操作；

其特征在于，陰離子交換層析包括：

a)上樣操作：將病毒液或經(jīng)過(guò)羥基磷灰石層析后的樣液上樣至陰離子交換層析柱；

b)洗脫操作：使用離子交換洗脫液對(duì)陰離子交換層析柱進(jìn)行洗脫；

羥基磷灰石層析包括：

1)上樣操作：將病毒液或經(jīng)過(guò)陰離子交換層析后的樣液上樣至羥基磷灰石層析柱；

2)洗脫操作：使用羥基磷灰石洗脫液對(duì)羥基磷灰石層析柱進(jìn)行洗脫；

離子交換洗脫液、羥基磷灰石洗脫液的pH獨(dú)立為7.0～9.5；

離子交換洗脫液、羥基磷灰石洗脫液獨(dú)立為磷酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、Hepes緩沖液、甘氨酸緩沖液、TEA緩沖液、巴比妥鈉緩沖液；

離子交換洗脫液、羥基磷灰石洗脫液獨(dú)立添加有水溶性鹽；

離子交換洗脫液中進(jìn)一步添加有濃度為50～1000mM的鹽；

羥基磷灰石洗脫液中進(jìn)一步添加有濃度為1～500mM的鹽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，其特征在于，進(jìn)一步包括使用第二離子交換洗脫液對(duì)陰離子交換層析柱進(jìn)行洗脫。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法，其特征在于，分別收集洗出的第一離子交換洗脫液和第二離子交換洗脫液，獲得不同結(jié)構(gòu)、組成或純度的病毒顆粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的純化方法，其特征在于，進(jìn)一步包括使用第二羥基磷灰石洗脫液對(duì)羥基磷灰石層析柱進(jìn)行洗脫。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的純化方法，其特征在于，分別收集洗出的第一羥基磷灰石洗脫液和第二羥基磷灰石洗脫液，獲得不同結(jié)構(gòu)、組成或純度的病毒顆粒。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，其特征在于，離子交換洗脫液、羥基磷灰石洗脫液為磷酸緩沖液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的純化方法，其特征在于，陰離子交換層析進(jìn)一步包括以下操作中的至少一個(gè)：

預(yù)平衡操作：包括使用離子交換預(yù)平衡液對(duì)陰離子交換層析柱進(jìn)行預(yù)平衡；

平衡操作：包括使用離子交換平衡液對(duì)陰離子交換層析柱進(jìn)行平衡；

預(yù)洗脫操作：包括使用離子交換預(yù)洗脫液對(duì)陰離子交換層析柱進(jìn)行預(yù)洗脫；

其中，離子交換預(yù)平衡液、離子交換平衡液、離子交換預(yù)洗脫液的pH獨(dú)立為7.0～9.5；

離子交換預(yù)平衡液、離子交換平衡液、離子交換預(yù)洗脫液獨(dú)立為磷酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、Hepes緩沖液、甘氨酸緩沖液、TEA緩沖液、巴比妥鈉緩沖液；

離子交換預(yù)平衡液、離子交換平衡液、離子交換預(yù)洗脫液獨(dú)立添加有水溶性鹽；

離子交換預(yù)平衡液中進(jìn)一步添加有濃度為1～500mM的鹽；

離子交換平衡液中進(jìn)一步添加有濃度約為1-500mM的鹽；

離子交換預(yù)洗脫液中進(jìn)一步添加有濃度為1～700mM的鹽。