[發明專利]生鮮牛奶中殘留雙氯芬酸鈉的檢測方法

在審

• 申請號: 201810175931.3
• 申請日: 2018-03-02
• 公開（公告）號: CN108445129A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 劉希望;楊亞軍;李劍勇;郭玉凡;路曉榮;孔曉君;李世宏;焦增華;秦哲
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所;鄭州百瑞動物藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

本發明提供生鮮牛奶中殘留雙氯芬酸鈉的檢測方法，將待測生鮮牛奶樣品和系列濃度標準溶液分別進行提取，提取以乙腈和乙酸銨為提取試劑，將提取所得溶液凈化后，使用流動相進行洗脫，進行液相色譜?串聯質譜檢測，根據待測生鮮牛奶樣品和系列濃度標準溶液的測定結果，定性或定量測定待測生鮮牛奶中的殘留雙氯芬酸鈉；待測生鮮牛奶樣品是在待測生鮮牛奶中加入同位素內標得到的；系列濃度標準溶液是在空白生鮮牛奶中加入雙氯芬酸鈉系列標準工作溶液和同位素內標得到的。本發明的內標為雙氯芬酸鈉(乙酰苯環¹³C)同位素標記物，采用串聯三重四極桿質譜作為檢測器，滿足定性、定量檢測生鮮牛奶中雙氯芬酸鈉殘留量的要求，方法簡單，結果準確可靠。

技術領域

本發明屬于藥物殘留檢測技術領域，具體涉及生鮮牛奶中殘留雙氯芬酸鈉的檢測方法。

背景技術

雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium，CAS 15307-79-6)作為苯乙酸類衍生物，系非甾體解熱鎮痛抗炎藥，在歐盟已被批準用于豬和牛，國內也已批準用于豬，即將批準用于牛，推薦劑量為2.5mg/kg，肌內注射，推薦治療周期為1～3d。歐盟規定(2009)雙氯芬酸鈉在牛奶中的殘留標識物為雙氯芬酸，殘留限量(MRLs)為0.1μg/kg。為了有效地檢測牛奶中該藥物的殘留量，急需開發一個準確、高效和簡便的分析方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種準確、高效和簡便的生鮮牛奶中殘留雙氯芬酸鈉的檢測方法。

本發明提供生鮮牛奶中殘留雙氯芬酸鈉的檢測方法，將待測生鮮牛奶樣品和系列濃度標準溶液分別進行提取，所述提取以乙腈和乙酸銨為提取試劑，將提取所得溶液凈化后，使用流動相進行洗脫，進行液相色譜-串聯質譜檢測，根據待測生鮮牛奶樣品和系列濃度標準溶液的測定結果，定性或定量測定待測生鮮牛奶中的殘留雙氯芬酸鈉；

所述待測生鮮牛奶樣品是在待測生鮮牛奶中加入同位素內標得到的；

所述系列濃度標準溶液是在空白生鮮牛奶中加入雙氯芬酸鈉系列標準工作溶液和同位素內標得到的。

作為優選，所述同位素內標為雙氯芬酸鈉13C同位素標記物。

作為優選，所述乙腈和乙酸銨的加入量為：每10.0±0.5g生鮮牛奶中加入10mL乙腈及1g乙酸銨。

作為優選，色譜分離時，流動相為乙腈-水-甲酸，等度洗脫，流速0.4ml/min，柱溫35℃，進樣量20μl；所述乙腈-水-甲酸的體積比為55：45：0.1。

作為優選，所述串聯質譜檢測的條件為：離子源為ESI+，噴霧器壓力35psi，毛細管電壓為+4000V，電子倍增器電壓增加值為+300V，干燥氣溫度為350℃，干燥氣流速為10L/min，進行多重離子反應監測。

本發明使用雙氯芬酸鈉(乙酰苯環¹³C)同位素標記物內標，采用串聯三重四極桿質譜作為檢測器，滿足生鮮牛奶中雙氯芬酸鈉的定性、定量檢測要求；樣品前處理簡單，檢測結果準確可靠。生鮮牛奶中雙氯芬酸鈉的添加量分別為0.03μg/kg和0.05μg/kg，雙氯芬酸鈉定量離子的信噪比SNR分別大于3和5(按照峰高對峰高計)，表明方法的檢測限和定量限分別可至0.03μg/kg和0.05μg/kg。生鮮牛奶中添加不同量的雙氯芬酸鈉，方法的平均回收率均在85％～110％的范圍內，批內和批間的變異系數均小于15％。具體可參見實施例中的實驗分析。

附圖說明

附圖用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發明的實施例一起用于解釋本發明，并不構成對本發明的限制。在附圖中：