[發明專利]一步法同時檢測HSV-1，HSV-2，VZV皰疹病毒的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201810172541.0
• 申請日: 2018-03-01
• 公開（公告）號: CN108441580B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 楊尚鑫;王一芳;劉杰;褚偉峰;潘玲玲
• 申請（專利權）人: 紹興迅敏康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

本發明公開了一種檢測樣本中α亞型的人皰疹病毒HSV?1，HSV?2，VZV的試劑盒，該試劑盒包括核酸裂解溶液，其中，核酸裂解溶液中包括磁珠，所述的核酸裂解溶液包括1M NaCl、0.01%Triton?X和0.001M KCl，磁珠為0.005微升的10mg/mL的羥基磁珠。利用該是試劑盒可以一步法提取核酸而不進行額外的步驟，可以快速簡單的進行核酸的擴增檢測，可以實現全自動化的操作。

技術領域

本發明屬于分子診斷生物學技術領域，涉及一步法核酸提取及熒光定量PCR 檢測試劑盒，具體涉及含三個探針的實時熒光定量PCR試劑，檢測患者血液、尿液、腦脊液等樣本中HSV-1，HSV-2，VZV三種常見人皰疹病毒的新型試劑盒。

背景技術

在性病醫院臨床上將與人類有關的皰疹病毒稱為人類皰疹病毒。皰疹病毒主要侵犯外胚層來源的組織，包括皮膚、粘膜和神經組織。感染部位和引起的疾病多種多樣，并有潛伏感染的趨向，威脅人類健康。

皰疹病毒(herpesviruses,HPV)是一群中等大小的雙鏈DNA病毒，有100 個以上成員，根據其理化性質分為α、β、γ三個亞科。α皰疹病毒(如單純皰疹病毒、水痘－帶狀皰疹病毒)增殖速度快,能引起細胞病變。β皰疹病毒(如巨細胞病毒)，生長周期長，感染細胞形成巨細胞。γ皰疹病毒(如EB病毒)，感染的靶細胞是淋巴樣細胞，可引起淋巴增生。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。引起人類疾病的皰疹病毒見表1。

表1人類皰疹病毒的種類及其所致的主要疾病

感染后的常見表象為：神經節腺體、腎淋巴組織、淋巴組織熱性皰疹；唇、眼、腦感染；生殖器皰疹水痘；帶狀皰疹單核細胞增多癥，眼、腎、腦和先天感染傳染性單核細胞增多癥、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、嬰兒急疹和其他一些如未知腹痛等病癥。

皰疹病毒感染極為普遍,多為隱性感染,少數為顯性感染。調查了人群中不同皰疹病毒的血清抗體發現在世界窮困地區的10歲兒童，有約90％感染過單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1)，而成人幾乎全部感染過HSV-1。在溫帶地區，90％的14歲兒童都感染過水痘－帶狀皰疹病毒。在西歐、英國和美國，約20～80％青少年都感染過巨細胞病毒(CMV)。在第三世界國家中,幾乎所有兒童均已感染過CMV。皰疹病毒除EB病毒外均易引起胎兒先天性感染，造成流產、早產、胎兒先天性畸形和出生后持續感染。由于CMV和HSV易引起孕婦的子宮頸感染，胎兒先天性感染的發生率亦較高。嬰兒先天性CMV感染發生率為0.5～1.5％。胎兒先天性感染的途徑是受染孕婦體內的病毒通過胎盤傳播給胎兒或經子宮頸上行感染胎兒。皰疹病毒的致癌性雖未完全肯定，但不少研究證明皰疹病毒感染與某些癌瘤的發生有關。如EB病毒與伯基特氏淋巴瘤和鼻咽癌、HSV-1與唇癌、HSV-2與子宮頸癌密切相關。有人認為此類病毒的基因可以部分或全部整合于寄主細胞的基因中，引起寄主細胞的癌變。皰疹病毒是一類有包膜的DNA病毒,現已發現60種以上。能引起哺乳類、鳥類、兩棲類和魚類的感染。1978年國際病毒命名委員會將皰疹病毒分為α、β和γ三組。能感染人類的單純皰疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型及水痘－帶狀皰疹病毒劃為α組,巨細胞病毒為β組,EB病毒為γ組。感染人類的皰疹病毒有共同的形態和結構。皰疹病毒呈球形，直徑為150～200nm，完整病毒由核心、核殼和包膜組成。病毒的核心為雙股DNA,并有少量的酶蛋白。核殼由 162個空心管狀殼微粒構成20面體。最外一層是包膜，由脂肪和糖蛋白組成，抗原結構存在于糖蛋白中。感染人類的皰疹病毒除EB病毒外，均能在二倍體細胞組織培養中生長，并引起明顯的細胞病變。