[發明專利]呼吸道合胞病毒核酸檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810171523.0
• 申請日: 2018-03-01
• 公開（公告）號: CN108374059A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 楊尚鑫;胡彬;劉杰;蔡媛媛
• 申請（專利權）人: 紹興迅敏康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

本發明公開了一呼吸道合胞病毒核酸快速檢測方法，包括以下步驟：以一定比例混合磁珠裂解液以及內控品，以準備至少一第一混合液，其中所述磁珠裂解液包括磁珠以及裂解液；在高溫條件下，添加樣品于所述第一混合液，以使得所述樣品在所述第一混合液中高溫熱裂解出核酸，然后冷卻到室溫以使得所述磁珠吸附所述核酸，形成吸附物，磁力吸附所述吸附物；以一定比例混合擴增反應液以及酶混合液，以準備至少一第二混合液；轉移所述吸附物于所述第二混合液，形成擴增液，并用實時熒光定量PCR儀器檢測所述擴增液。

技術領域

本發明屬于生命科學與生物技術領域，具體涉及一呼吸道合胞病毒核酸檢測試劑盒及其檢測方法，其中所述呼吸道合胞病毒核酸快速檢測方法在檢測呼吸道合胞病毒RSV時不需要進行額外的核酸提取過程，具有成本低廉特異性強，靈敏度高，操作檢測，結果可靠的優點。

背景技術

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是一種單鏈RNA呼吸道病毒，主要是通過呼吸道分泌物傳播，其傳染力非常強，幾乎所有人在3歲前都被感染過，并且在感染過后身體不能對其產生免疫能力，所以人的終生都會有可能被感染這種病毒。

呼吸道合胞病毒RSV是造成兒童細支氣管炎和哮喘的首要原因，其死亡率高達5％，是流感死亡率的10倍！呼吸道合胞病毒RSV不僅對兒童會造成危險，也會對老人造成嚴重威脅，呼吸道合胞病毒RSV每年導致超過65歲以上老人的死亡率僅次于流感導致的死亡率，尤其是對于有慢性阻塞性肺病(COPD)的病人，其嚴重程度與流感相當，有33％COPD患者會由于感染呼吸道合胞病毒RSV而最終導致肺炎，肺炎的死亡率高達5％。據統計表明，全世界每年因呼吸道合胞病毒RSV導致3.4百萬人住院，66000–199000人死亡。

呼吸道合胞病毒RSV的流行時間經常與流感病毒的流行時間重合。在臨床上，呼吸道合胞病毒與流感的癥狀非常相似，難以區別，但是針對它們的治療方法非常不同，對于不同人群的威脅也不一樣，正是因為呼吸道合胞病毒RSV對人體存在這么大的安全隱患，故在臨床醫學中需要快速，簡單，可行地診斷呼吸道合胞病毒RSV。

目前臨床上診斷呼吸道合胞病毒RSV的主要有以下幾種方式：

第一，對呼吸道合胞病毒RSV進行分離培養和鑒定。這種方式是最傳統的實驗室診斷技術，具體而言，檢測步驟如下：采取患者的鼻咽分泌物，從中分離出流感病毒或呼吸道合胞病毒，并對其進行培養和鑒定。然而病毒在細胞培養中存在生長緩慢加之病毒不穩定的問題，并且需要配置以嚴格的運輸過程和復雜的檢測技術，導致這種檢測方法檢測費用高，不適于快速診斷呼吸道合胞病毒RSV。

第二，血清診斷呼吸道合胞病毒RSV。檢測步驟如下：對患者雙份血清抗體進行測定，原理是恢復期病人血清中抗流感病毒或合胞病毒抗體滴度相較于急性期病人血清中抗流感病毒或合胞病毒抗體滴度有4倍或4倍以上升高，在實際檢測過程中，可應用補體結合試驗、免疫熒光、免疫酶等方法測定病毒特異性IgM抗體，從而早期診斷呼吸道合胞病毒RSV。經長期應用證明，該方法技術可靠、重復性好、特異性強，然而病人體內特異性抗體產生慢，IgM抗體也常在病后l周內才會產生，這樣的檢測方法需時長，并且只反映的是感染的一個間接指標，不能替代直接的病原學檢測。

第三，檢測呼吸道合胞病毒RSV核酸成分。該檢測方法由于操作簡單，又擁有極高敏感性和特異性，已經漸趨主流。目前國內的核酸診斷主要是應用Taqman探針技術并結合實時定量PCR技術檢測特定核酸基因。然而目前國內呼吸道合胞病毒RSV的核酸檢測試劑盒都需要對樣本進行核酸提取，針對核酸的提取過程需要額外的試劑，并且核酸提取過程操作繁瑣，費時費力。另外，核酸提取過程容易因為操作過程中存在的污染，導致呼吸道合胞病毒RSV檢測的假陽性。

綜上所述，現有技術中針對呼吸道合胞病毒RSV的檢測方法存在或多或少的缺陷，如何快速高效地檢測呼吸道合胞病毒RSV已經成為生物醫學領域亟待解決的一重大問題。

發明內容