[發明專利]呼吸道合胞病毒核酸檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810171523.0
• 申請日: 2018-03-01
• 公開（公告）號: CN108374059A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 楊尚鑫;胡彬;劉杰;蔡媛媛
• 申請（專利權）人: 紹興迅敏康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

1.一種呼吸道合胞病毒核酸快速檢測方法，其中所述呼吸道合胞病毒核酸快速檢測方法被適用于檢測樣品是否為呼吸道合胞病毒，其特征在于，所述呼吸道合胞病毒核酸快速檢測方法包括以下步驟：

S1:以一定比例混合磁珠裂解液以及內控品，以準備至少一第一混合液，其中所述磁珠裂解液包括磁珠以及裂解液，其中內控品被實施為監控試劑；

S2:在高溫條件下，添加所述樣品于所述第一混合液，以使得所述樣品在所述第一混合液中高溫熱裂解出核酸，然后冷卻到室溫以使得所述磁珠吸附所述核酸，形成吸附物，磁力吸附所述吸附物，并吸棄所述第一混合液的上清液；

S3:以一定比例混合擴增反應液以及酶混合液，以準備至少一第二混合液，其中所述引物包括對應所述核酸的核酸引物以及對應所述內控品的內控引物，其中所述探針包括對應所述核酸引物的核酸探針以及對應所述內控引物的內控探針；

S4:轉移所述吸附物于所述第二混合液中，形成擴增液；以及

S5:實時熒光定量PCR儀器擴增檢測所述擴增液。

2.根據權利要求1所述的呼吸道合胞病毒快速檢測方法，其特征在于，所述呼吸道合胞病毒快速檢測方法進一步包括以下步驟：

S6：在與所述步驟S2相同的條件下，添加等量的陽性對照物于全新的第一混合液，添加等量的陰性對照物于另一全新的第一混合液，得到吸附物，其中所述陽性對照物被實施為含有呼吸道合胞病毒的目的片段的慢病毒，所述陰性對照物被實施為水溶液。

3.根據權利要求1到2任一所述的呼吸道合胞病毒快速檢測方法，其特征在于，其中所述核酸引物具有GF1/GR1對應的序列，所述核酸探針具有P1對應的序列。

4.根據權利要求3所述的呼吸道合胞病毒快速檢測方法，其特征在于，其中所述內控引物具有GF2/GR2對應的序列，所述內控探針具有P2對應的序列。

5.根據權利要求4所述的呼吸道合胞病毒快速檢測方法，其特征在于，其中所述探針的5端修飾熒光報告基團，所述探針的3端修飾熒光淬滅基團，所述熒光報告基團選自FAM,VIC,JOE或Texas Red中的一種，所述內控探針熒光報告基團選自ROX,CY3或CY5的一種，所述熒光淬滅基團選自TAMARA,BHQ-2和BHQ-1的一種。

6.一呼吸道合胞病毒檢測試劑盒，其中所述呼吸道合胞病毒檢測試劑盒被適用于檢測樣品是否為呼吸道合胞病毒，所述呼吸道病毒檢測試劑盒包括：

磁珠裂解液，其中所述磁珠裂解液包括磁珠以及裂解液；

擴增反應液，其中所述擴增反應液包括反應液，特定序列的引物以及特定序列的探針，其中所述引物進一步包括核酸引物以及內控引物，其中所述探針包括對應所述核酸引物的核酸探針以及對應所述內控引物的內控探針；

酶反應液，其中所述酶反應液包括至少一活性酶；以及內控品，其中所述內控品被實施為監控試劑。

7.根據權利要求6所述的呼吸道合胞病毒檢測試劑盒，其特征在于，所述呼吸道合胞病毒檢測試劑盒進一步包括陽性對照物以及陰性對照物，其中所述陽性對照物被實施為含有呼吸道合胞病毒的目的片段的慢病毒，所述陰性對照物被實施為水溶液。

8.根據權利要求6到7任一所述的呼吸道合胞病毒檢測試劑盒，其特征在于，所述所述核酸引物具有GF1/GR1對應的序列，所述核酸探針具有P1對應的序列，其中所述內控引物具有GF2/GR2對應的序列，所述內控探針具有P2對應的序列。

9.根據權利要求8所述的呼吸道合胞病毒檢測試劑盒，其特征在于，其中所述探針的5端修飾熒光報告基團，所述探針的3端修飾熒光淬滅基團，所述核酸探針熒光報告基團選自FAM,VIC,JOE或Texas Red中的一種，所述內控探針熒光報告基團選自ROX,CY3或CY5的一種，所述熒光淬滅基團選自TAMARA,BHQ-2和BHQ-1的一種。

10.根據權利要求9所述的呼吸道合胞病毒檢測試劑盒，其特征在于，所述酶混合液被實施為逆轉錄酶，熱啟動Taq酶以及UNG酶的一種，其中所述內控品被實施為失去活性的噬菌體，其中所述裂解液被實施為氯化鈉、氯化鉀以及二氯化鎂的混合液，所述反應液被實施為包含但不限于Tris-Hcl，MgCl2，dNTP以及KCl的混合液。