[發明專利]一種過表達COX5A轉基因鼠模型及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201810171251.4
• 申請日: 2018-03-01
• 公開（公告）號: CN108396036B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 習楊彥彬;金華;陳波;張麗;王廷華;張連峰
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/89;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京權智天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11638
• 代理人: 張廷利

本發明公開了一種過表達COX5A轉基因鼠模型及其構建方法與應用，包括以下步驟：PCR克隆擴增目的基因COX5A的開放讀碼框；構建pcDN A3.1(+)?m?COX5A質粒；將構建好的質粒載體轉入菌種進行DNA的提取，并回收DNA片斷；純化DNA，對DNA進行溶解回收；用TE顯微注射稀釋液稀釋DNA樣品；將構建好的轉基因片段線性化，用顯微注射法制作轉基因小鼠；PCR法鑒定陽性轉基因鼠；篩選出COX5A表達水平最高的品系，建立穩定的COX5A過表達小鼠模型。本發明首次獲得過表達COX5A轉基因鼠模型，為制備預防或者治療腦老化、老化相關疾病藥物提供了新的策略。

技術領域

本發明屬于動物模型技術領域，具體地說，涉及一種過表達COX5A轉基因鼠模型及其構建方法與應用。

背景技術

腦老化，是一種機體為適應隨年齡加劇的衰老狀態做出的適應性的、不可逆的改變，這一過程通常會導致學習能力的下降與部分記憶的喪失。腦老化朝著惡性方向發展到一定階段有可能會演變成一些常見而棘手的疾病，如阿爾茨海默病(AD)、帕金森綜合癥(PD)以及其他的一系列老化相關的臨床疾病。這樣的狀況也引起了越來越多國家和社會機構的重視，并投入了大量的人力、財力、物力，在神經科學相關領域開展了大量的研究工作。過去的1990-1999年曾被美國政府譽為“腦研究的十年”，就是各方投入的真實寫照。但是這樣高成本的投入卻收效甚微，盡管花費了無數的心力，到目前為止，用于預防和治療腦老化及其相關疾病的措施仍然十分有限，遠遠不能滿足日益壯大的老齡化社會的需求。

快速老化小鼠(Senescence-Accelerated Mouse，SAM)是一種研究老化的國際公認動物模型，是通過多代近親雜交得到的自然衰老動物，其遺傳背景是AKR/J小鼠。SAM主要包括兩大類，即快速老化系(SAM-prone，SAMP)以及抗快速老化系(SAM-resistant，SAMR)。而作為自然老化品系中的代表，快速老化系中的P8系(SAMP8)，因其早期就表現出認知功能的缺損以及與年齡相關的學習記憶能力的丟失而被廣泛運用于腦老化相關學習記憶機制的研究，成為實驗研究主要的老化動物研究模型。

腦老化過程進展會引發一系列的病理改變，其中最引人注意的就是引發學習記憶功能障礙，而這也正是AD對患者的主要危害之一，嚴重影響患者生活質量和尊嚴。有學者通過對人類病例分析及實驗動物模型的研究發現，記憶力的衰退早在老化的最初階段就開始了。大量的臨床和實驗室的研究資料均顯示海馬在學習、記憶及認知過程中都發揮了重要的作用，是一個重要的學習記憶功能中樞。因此，海馬細胞的突觸長時程增強(LTP)記錄被廣泛用作研究記憶的細胞和分子模型，特別是運用于AD發病機制與治療的相關研究中。

而有關AD的發病機制，可以說是眾說紛紜、百家爭鳴，在神經科學領域仍然是一個懸而未決之謎，綜合研究報道，目前為止，大家較為公認的發病學說主要集中在以下幾個方面：1)β-淀粉樣蛋白的異常沉淀；2)tau蛋白異常磷酸化所是所致的神經元纖維纏結(NFTs)；3)AD發病相關基因學說，包括β-淀粉樣前體蛋白(APP)基因、早老素1(PS1)基因、早老素2(PS2)基因、載脂蛋白E(ApoE)基因出現異常等等；4)膽堿能損傷學說；5)細胞內鈣離子超載學說；6)自由基損傷學說；7)免疫反應學說等等。其中，β-淀粉樣蛋白在學習記憶相關腦區的異常沉淀被公認為所有病因導致AD發病的最終環節，而β-淀粉樣蛋白的異常沉積形成的老年斑(SP)也成為了AD確診的重要病理診斷依據。