[發明專利]一種花色苷高效液相色譜檢測方法

有效

• 申請號: 201810168562.5
• 申請日: 2018-02-28
• 公開（公告）號: CN108445127B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 袁麗;孫楚楚;黨慶玲;高瑞昌
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54
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本發明公開了一種花色苷高效液相色譜檢測方法，涉及水花色苷檢測技術領域，尤其涉及花色苷黃烊鹽化條件的優化對花色苷檢測技術準確性的提高。本發明根據花色苷在酸性和中性條件下結構的變化，用檸檬酸對其進行黃烊鹽化，高效液相對花色苷進行定量檢測。該發明的優點在于：提高花色苷黃烊鹽型的轉化率，提高花色苷檢測前和檢測過程中的穩定性，提高花色苷檢測的準確性。

技術領域

本發明涉及花色苷檢測技術領域，尤其涉及花色苷黃烊鹽化條件的優化對花色苷檢測技術準確性的提高。

背景技術

花色苷是一種水溶性色素，具有良好的保健功能，如抗氧化，抗癌，抗炎癥，預防心血管疾病等。但是花青素的穩定性卻很低，受很多因素影響，如溫度、pH、濃度、光線、酶等。在諸多影響因素中pH對花色苷的影響最為顯著。在不同的pH環境下花色苷會呈現不同的形式：在pH2的時候，主要是呈現出紅色的花色烊陽離子形式；pH在3-6之間時，會轉化成無色的甲醇假堿或查爾酮；pH中性條件下，花色苷則會轉換成紫色或淡紫色的中性醌式酮。同時，花色苷的穩定性會隨著pH值的升高而降低，pH≤2時花色苷具有較高的穩定性，pH≥7時穩定性很低。目前花色苷測定條件均為pH2.0，需要將pH7.0下的中性醌式酮轉換為花色烊陽離子形式進行檢測，而這樣兩種條件下花色苷能否百分之百轉換是決定檢測結果準確性和可靠性的關鍵環節，也影響其吸收轉運率的真實評價。本發明將利用高效液相技術，從花色苷黃烊鹽化條件的選擇角度切入，研究酸化條件對花色苷檢測準確性的影響，建立一種搞準確性的花色苷檢測方法。

發明內容

本發明根據花色苷在酸性和中性條件下結構的變化，利用高效液相對花色苷進行定量檢測，研究不同有機酸酸化對花色苷檢測的影響，已選擇出檸檬酸，能使花色苷在酸性中性之間具有高轉化率，提高花色苷檢測的準確性。

本發明一種花色苷高效液相色譜檢測方法，按照下述步驟進行：

(1)pH＝2的檸檬酸溶液的配制、液相流動相的配制；

(2)花色苷溶液的量取；

(3)花色苷黃烊鹽化；

(4)過膜：0.22μm水相濾膜；

(5)高效液相測定：色譜柱：C₁₈柱，250mmX4.6mmX5μm；流動相：A為含體積分數為1％甲酸的水溶液，B為含有體積分數為1％甲酸的乙腈溶液；檢測波長：525nm柱溫：35℃；進樣量：20μL，進行梯度洗脫；

(6)標曲：將花色苷溶液稀釋不同倍數，用高效液相檢測，根據不同濃度的出峰面積做出標曲；

(7)數據處理：在AgiLent 1260配制的離線數據處理軟件上進行，確定出峰時間，去雜峰，手動加峰，記錄峰面積；利用spss(統計產品與服務解決方案軟件)軟件進行數據處理；

(8)最后根據樣品出峰面積，以外標法算得花色苷濃度。

其中步驟(1)中所述的pH＝2的檸檬酸溶液的配制方法如下：稱取3.84g一水合檸檬酸，溶于100mL蒸餾水中，用Ph計測試，再用檸檬酸和0.1MNaOH微調；液相流動相的配制方法如下：A液，準確量取10mL甲酸注入1000mL容量瓶中，用超純水定容至1000mL。B液，準確量取10mL甲酸注入1000mL容量瓶中，用乙腈定容至1000mL。

其中步驟(3)中所述的花色苷黃烊鹽化方法如下：將量取的花色苷溶液與配制好的檸檬酸溶液1:1混合震蕩1min。

其中步驟(4)中所述的高效液相測定方法中的梯度洗脫方法如下表：