[發明專利]一種細胞培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201810166153.1
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108424874A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 艾譞;林杰庚
• 申請（專利權）人: 廣州瑞貝斯藥業有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明公開了一種細胞培養基，包括以下含量的組分，DMEM/F12培養基80～90v/v％、絲膠蛋白溶液25～500mg/ml、殼聚糖季銨鹽溶液2.0～5mg/ml、人血白蛋白35～70mg/ml、植物血球凝集素20～80mg/ml、維生素C 20～100ug/ml、維生素E 20～80ug/ml、表皮生長因子0.5～10ng/ml、類胰島素生長因子5～20ng/ml、L?谷氨酰胺1～5mmol/ml，使用絲膠蛋白能促進細胞生長，殼聚糖季銨鹽溶液用于細胞培養基，能夠提高細胞增殖能力和殺瘤率，與絲膠蛋白配合使用，能夠提高細胞的生長能力。蕓豆凝集素具有凝集諸如血細胞、淋巴細胞、精子細胞等作用，在體外細胞培養中，植物凝集素可以使淋巴細胞增殖；在整體實驗中，植物凝集素可以提高機體的免疫能力；在絲膠蛋白、殼聚糖季銨鹽溶液、凝集素協同作用下，T淋巴細胞增殖倍數以及存活率、殺瘤率顯著增加。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體涉及一種細胞培養基及其制備方法。

背景技術

細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質，也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。

1951年厄爾開發了供動物細胞體外生長的人工合成培養基(MEM)。合成培養基的種類相當多。合成培養基成分已知，便于對實驗條件的控制。但與天然培養基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代，因此，細胞培養中使用的基礎合成培養基還必須加入一定量的天然培養基成分，以克服合成培養基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。動物血清成分復雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對細胞生長很有效，但后期對培養產物的分離、提純以及檢測會造成一定困難。另外高質量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。

基于此，無血清培養基的研究就成為細胞培養領域的一項重要課題。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足之處而提供了無血清細胞培養基及其制備方法。

為實現上述目的，所采取的技術方案：

一種細胞培養基，主要包括以下含量的組分，DMEM/F12培養基80～90v/v％、絲膠蛋白溶液25～500mg/ml、殼聚糖季銨鹽溶液2.0～5mg/ml、人血白蛋白35～70mg/ml、植物血球凝集素20～80mg/ml、維生素C 20～100ug/ml、維生素E 20～80ug/ml、表皮生長因子0.5～10ng/ml、類胰島素生長因子5～20ng/ml、L-谷氨酰胺1～5mmol/ml。

優選地，主要包括以下含量的組分，DMEM/F12培養基80～90v/v％、絲膠蛋白溶液100～400mg/ml、殼聚糖季銨鹽溶液2.5～4mg/ml、人血白蛋白40～60mg/ml、植物血球凝集素50～60mg/ml、維生素C 50～80ug/ml、維生素E20～80ug/ml、表皮生長因子2～10ng/ml、類胰島素生長因子10～15ng/ml、L-谷氨酰胺2～5mmol/ml。

申請人發現各組分的濃度在該范圍內，其T淋巴細胞具有良好的增殖倍數以及存活率，其分別達到84％以上，以及存活率在96％以上，殺瘤率86％以上。

優選地，主要包括以下含量的組分，DMEM/F12培養基90v/v％、絲膠蛋白溶液200mg/ml、殼聚糖季銨鹽溶液3mg/ml、人血白蛋白40mg/ml、植物血球凝集素60mg/ml、維生素C 60ug/ml、維生素E 60ug/ml、表皮生長因子5ng/ml、類胰島素生長因子10ng/ml、L-谷氨酰胺3mmol/ml。

申請人發現，各組分在此濃度下，其效果最佳。