[發(fā)明專利]一種UPLC-Q-Tof/MS同時測定保健酒中四種天然產(chǎn)物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810165820.4
• 申請日: 2018-02-28
• 公開（公告）號: CN108362805B
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬金同;劉露;馬雷;胡心行;劉國英;李安軍;周慶伍;沈小梅
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽瑞思威爾科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 喬恒婷

1.一種UPLC-Q-Tof/MS同時測定保健酒中四種天然產(chǎn)物的方法，其特征在于：首先使用Ben的C18色譜柱進行梯度洗脫分離，然后采用電噴霧離子源，在正離子模式下進行掃描，對四種天然產(chǎn)物對應(yīng)的特征離子進行提取并獲得積分峰面積，從而實現(xiàn)對甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸的快速分析鑒定；包括如下步驟：

步驟1：標準品的準備

將甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸分別用乙腈溶解，配成母液標品，母液標品中甜菜堿100mg/L、蘆丁400mg/L、白藜蘆醇400mg/L、葉酸50mg/L；

步驟2：色譜檢測條件

色譜柱：ACQUITY UPLC Ben C18 Column，2.1mm×100mm，1.7μm；

流動相：流動相A：1％甲酸水溶液，流動相B：乙腈，梯度洗脫；

柱溫：30℃；

進樣量5μL；

步驟3：質(zhì)譜檢測條件

質(zhì)譜儀WATERS Xevo G2-XS Q Tof/MS，電噴霧離子源，正離子掃描模式，離子源溫度120℃，脫溶劑溫度500℃，脫溶劑氣流量800L/h，錐孔氣流量50L/h，掃描范圍50-1200Da，毛細管電壓：1kV，取樣錐孔電壓：20V，掃描時間：0.5s，參比質(zhì)量：亮氨酸腦啡呔[M+H]+＝556.2771；

步驟4：標準曲線的繪制

采用外標法定量，將步驟1配制的甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸的四種母液標品混合配成混合標準儲備液，然后用乙腈-水溶液逐級稀釋獲得不同濃度的混合標準品溶液，以每個濃度下標準品對應(yīng)的母離子提取離子色譜圖中的積分峰面積為縱坐標，該標準品的濃度為橫坐標，建立標準曲線，分別獲得甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸的四個標準曲線；

步驟4中，甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸分別對應(yīng)的母離子為：甜菜堿選擇m/z118.0868、蘆丁選擇m/z 611.1612、白藜蘆醇選擇m/z 229.0865、葉酸選擇m/z 442.1475；

步驟5：待測樣品的前處理

取待測樣品20mL，真空濃縮至10mL，然后用超純水沖洗定容至20mL，過0.22μm濾膜后待測；

步驟6：待測樣品的檢測

將經(jīng)步驟5前處理后的待測樣品送樣，按照步驟2、步驟3的檢測條件進行檢測，將獲得的待測樣品譜圖與標準品譜圖對比，保留時間相同的即為對應(yīng)物質(zhì)，然后通過標準曲線線性回歸方程獲得對應(yīng)甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟2中，梯度洗脫程序：0-2min，92％A+8％B～80％A+20％B；2-3min，80％A+20％B～70％A+30％B；3-4min，70％A+30％B～30％A+70％B，4-7min，70％A+30％B～92％A+8％B；7-10min，92％A+8％B，流速0.3mL/min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟4中，用乙腈-水溶液逐級稀釋混合標準儲備液時，至少獲得五個不同濃度的混合標準品溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于：

步驟4中，混合標準品溶液中甜菜堿、蘆丁、白藜蘆醇、葉酸的濃度范圍為100-500μg/L。