[發(fā)明專利]一種植物油中黃曲霉毒素B1的提取凈化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810165348.4
• 申請日: 2018-02-28
• 公開（公告）號: CN108732260A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王亞萍;王朝仁;楊黎耀;楊柳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所;王朝仁;楊黎耀;楊柳
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 浙江杭知橋律師事務(wù)所 33256
• 代理人: 王梨華;陳麗霞

本發(fā)明涉及植物油中毒素前處理方法，公開一種植物油中黃曲霉毒素B1的提取凈化方法，植物油樣經(jīng)乙腈溶解，冷凍過夜，取上清液冷凍離心完成凈化過程，凈化液經(jīng)衍生處理后上液相色譜儀—熒光檢測器進(jìn)行測定。本發(fā)明利用植物油在低溫狀態(tài)會結(jié)塊這一物理特性，采用低溫冰箱冷凍處理提取試樣，使植物油和乙腈提取液分離，同時利用密度差異，采用冷凍離心進(jìn)一步脫除提取液中殘留的植物油懸浮顆粒，再次凈化提取液。本發(fā)明處理技術(shù)簡單可行，無需要用到國標(biāo)方法的免疫親和柱，降低前處理費(fèi)用，為生產(chǎn)企業(yè)減少質(zhì)量安全控制成本，并達(dá)到理想的凈化效果。方法重現(xiàn)性良好，低、中、高濃度黃曲霉毒素B1加標(biāo)回收率均在90％以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物油中毒素前處理方法，尤其涉及一種植物油中黃曲霉毒素 B1的提取凈化方法。

背景技術(shù)

植物油是人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢苫蛉钡闹匾巢模谢ㄉ汀⒂筒枳延汀⒂?米油、大豆油等，其產(chǎn)品質(zhì)量安全越來越受消費(fèi)者關(guān)注，特別是近年來涉油的 食品安全事件頻發(fā)，有關(guān)部門已高度重視，并制定相應(yīng)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，其中黃曲霉 毒素B1便是其重要的衛(wèi)生指標(biāo)。

黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1簡寫為AFTB1)是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难?生物，含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)?香豆素)。黃曲霉毒素B1存在于 土壤、各種堅果，特別是花生和核桃中。在食用油、大豆、稻谷、玉米、通心 粉、調(diào)味品、牛奶、奶制品等產(chǎn)品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。一般以熱帶和亞 熱帶等南方高溫、高濕地區(qū)受污染最為嚴(yán)重，食品中AFTB1的檢出率比較高。 AFTB1是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強(qiáng)的一種，對包括人和若干動物具有強(qiáng)烈 的毒性，其毒性作用主要是對肝臟的損害，因此必須嚴(yán)格限制其在食品中的含量。中國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB 2761-2017)中規(guī)定了幾種主要易受污染的食物中 AFTB1的允許量標(biāo)準(zhǔn)，玉米、花生、花生油中黃曲霉毒素B1允許量為≤20μ g/kg，其他植物油中限量為10μg/kg。而歐盟等國于2002年對糧食，花生及其 產(chǎn)品中的AFTB1含量進(jìn)行的修訂規(guī)定，人類直接使用的花生中AFTB1含量需 ≤2μg/kg，作為食品原料進(jìn)口的花生AFTB1含量需≤8μg/kg。可見嚴(yán)格控制 質(zhì)量，及時了解、掌握植物油中AFTB1含量尤為必要。

除油是植物油中AFTB1含量測定的關(guān)鍵點(diǎn)和難點(diǎn)。植物油樣品中的脂肪酸、 蛋白質(zhì)含量極高，但衍生處理前需將提取液中這類物質(zhì)徹底清除，否則衍生將 無法進(jìn)行或不徹底導(dǎo)致檢測結(jié)果偏低。而AFTB1、植物油和極性較強(qiáng)的有機(jī)試 劑互溶，以致常規(guī)的液液提取難以達(dá)到良好的提取效果。目前，植物油中AFTB1 含量測定主要采用的是國際通用的免疫親和柱凈化、液相色譜—熒光檢測器檢 測法，該法中規(guī)定使用的前處理凈化方法耗材較為昂貴，一般實驗室較難承受， 這給不少科研工作者和生產(chǎn)企業(yè)帶來困擾。為此，本研究團(tuán)隊發(fā)明了一種低成 本、高準(zhǔn)確度測定植物油中AFTB1含量的前處理凈化方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中除油需要過柱成本較高的缺點(diǎn)，提供一種植物油中 黃曲霉毒素B1的提取凈化方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案得以解決：

一種植物油中黃曲霉毒素B1的提取凈化方法，包括以下步驟：

A.將植物油樣品混合均勻，稱取植物油樣品加入比色管中；

B.在裝有植物油樣品的比色管中加入乙腈定容，蓋上塞子渦旋混勻 1～5min；

C.將定容后的比色管放入低溫冰箱中冷凍，具塞端向上、豎向放置比色管， 冷凍時間為5h～16h；冷凍提取液可以去除其中絕大部分的蛋白質(zhì)、脂肪，利用 植物油在低溫狀態(tài)會結(jié)塊這一物理特性，采用低溫冰箱冷凍處理提取試樣，已 達(dá)到植物油和乙腈提取液分離效果。

D.冷凍后取出比色管，得到下層固體與上層冷凍凈化提取液，吸取冷凍凈 化提取液加入離心管中；