[發明專利]一種檢測豬脾轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合免疫效果的方法

有效

• 申請號: 201810164427.3
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108088986B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 謝兆文;譚禮寧;呂小婷;葉盛聰;邱靈珊;陳盛勇;劉楚楚;徐磊;劉友霖
• 申請（專利權）人: 派生特（福州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/071;G01N33/50
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發明提供了一種檢測豬脾轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合免疫效果的方法，包括以下步驟：1）細胞培養；2）細胞接種，控制細胞密度；3）將偽狂犬病活疫苗與豬脾轉移因子上樣于細胞培養板中，培養孵育細胞；4）將細胞用MTT溶液進行反應，繼續孵育，然后用DMSO進行溶解處理，最后將細胞板放置與酶標儀中測量OD值，計算細胞活性。本發明方法具有檢測背景低、靈敏度高、專屬性強、準確度高、重復性好等優點，尤其適用于豬脾轉移因子和偽狂犬病活疫苗聯合免疫時生物活性的檢測及質量標準的建立。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種檢測豬脾轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合免疫效果的方法。

背景技術

轉移因子（Transfer Factor，TF）能調節動物機體免疫功能，協同疫苗免疫，縮短疫苗免疫應答期，提高動物免疫水平，具有非常廣闊的應用前景。轉移因子是存在于人和動物白細胞中的可透析小分子物質，能將供體所具有的細胞免疫功能轉移給受體，從而非特異性地增強受體的免疫功能。轉移因子的成分主要包括低聚核苷酸和多肽，能誘導機體免疫細胞活化，增強機體免疫力，能轉移包括病毒、細菌、寄生蟲、真菌、組織相容性抗原和腫瘤抗原等多種抗原的細胞免疫。此外，轉移因子具有分子質量小、無毒、無抗原性、不引起過敏反應、不產生對抗抗體且可超越種系界限應用等優點。

由于轉移因子使用安全、作用迅速、效果顯著、無藥物殘留、無抗原性、無毒副作用，且來源廣，同時，其作為免疫激發劑和輔助制劑，可顯著提高對動物疾病的防控效果，市場認可度逐漸提高。因此，轉移因子在獸醫臨床領域，將逐步地釋放其應用優勢，轉移因子產品的開發與應用將對畜牧業的發展具有十分重要的現實意義。

偽狂犬病是由偽狂犬病毒引起的發生在多種家畜和野生動物體內的一種急性傳染病，以發熱、奇癢、腦脊髓炎為主要發病癥狀。偽狂犬病最早在1813年發生于英國的牛群中。Aujeszky、Schmiedhoffer和Sangirg相繼發現并分離出PRV。成年豬常表現為隱性感染，妊娠母豬感染后可引起流產、死胎以及呼吸系統疾病癥狀，無奇癢。新生仔豬感染后除了出現神經癥狀外，還可侵害消化系統。本病呈世界性分布。豬既是本病原的原發感染宿主，又是病毒的長期貯存者和排毒者，在偽狂犬病的傳播上起著重要作用。偽狂犬病給豬養殖業造成的危害僅次于豬瘟。

大量的試驗研究表明， 轉移因子對偽狂犬病活疫苗具有協同作用，能顯著提高機體細胞免疫水平，縮短機體免疫應答期，促進抗體的產生，并延長抗體高峰期，使之維持更長的時間。但目前檢測轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合使用效果的主要通過檢測抗體及細胞因子來展現，檢測成本高、周期長且生物體個體差異大，檢測結果較不穩定。因此建立一種快速、方便、檢驗成本低且檢驗結果相對穩定的檢測豬脾轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合免疫效果的方法具有重要意義。

發明內容

本發明目的在于提供一種在細胞上展現的、檢驗成本低且檢驗結果相對穩定的檢測豬脾轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合免疫效果的方法

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測豬脾轉移因子與偽狂犬病活疫苗聯合免疫效果的方法，其包括以下步驟：

1）取偽狂犬病活疫苗原液，用含1.8-2.2%新生牛血清、0.8-1.2%青霉素-鏈霉素雙抗的完全DMEM培養基稀釋至含200 TCID₅₀的病毒液；

取豬脾轉移因子，用含1.8-2.2%新生牛血清、0.8-1.2%青霉素-鏈霉素雙抗的完全DMEM培養基稀釋將多肽含量稀釋至1 mg/mL；

2）在含8-12%新生牛血清、0.8-1.2%青霉素-鏈霉素雙抗的完全DMEM培養基中將細胞培養至單層；