[發明專利]家蠶30K蛋白19G1基因啟動子LP19及其表達載體和應用

在審

• 申請號: 201810162527.2
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108148839A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 姚倫廣;劉陽坤;李娜;胡小敏;王鐵軍;程天才;尹延震
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/866;C12N15/66;C12N15/11;C12N9/02
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 陸菊華

1.家蠶30K蛋白19G1基因啟動子LP19，其特征在于，所述的啟動子核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

2.含有如權利要求1所述的啟動子LP19的重組桿狀病毒表達載體pFBDM-LP19-Fluc-IG。

3.根據權利要求2所述的重組桿狀病毒表達載體pFBDM-LP19-Fluc-IG的構建方法，其特征在于，是將pGL3.Basic載體和pFBDM-IG載體分別用BamHI和SalI進行酶切、膠回收、連接、轉化、酶切驗證和測序，得到載體pFBDM-Fluc-IG；然后將家蠶LP19啟動子的PCR產物和pFBDM-Fluc-IG載體用NruI和BamHI進行酶切、膠回收、連接、轉化、酶切驗證和測序，即得到載體pFBDM-LP19-Fluc-IG。

4.用于擴增如權利要求1所述的家蠶30K蛋白19G1基因啟動子LP19的PCR特異性引物，其特征在于，所述正向引物LP19F的序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，反向引物LP19R的序列如序列表中SEQ ID NO：3所示。

5.根據權利要求1所述的家蠶30K蛋白19G1基因啟動子LP19在調控目的基因表達中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述目的基因為螢火蟲熒光素酶基因。

7.根據權利要求1所述的家蠶30K蛋白19G1基因啟動子LP19在桿狀病毒表達系統構建中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，是將家蠶30K蛋白19G1基因啟動子LP19與目的基因連接構建表達載體，轉座后將重組菌液感染Sf9細胞獲得重組桿狀病毒，使LP19啟動子驅動該目的基因在Sf9細胞中表達。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，是將家蠶30K蛋白19G1基因啟動子與目的基因連接構建表達載體，轉座后將重組菌液感染BmN細胞獲得重組桿狀病毒，使LP19啟動子驅動該目的基因在家蠶幼蟲中表達。

10.根據權利要求7-9所述的應用，其特征在于，所述目的基因為螢火蟲熒光素酶基因。