[發(fā)明專利]一種適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法及其試劑盒和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810161602.3
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108330181A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮宇亮;姜昊;陳海洋;鄭曉斌
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州睿邁英基因檢測科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6804
• 分類號: C12Q1/6804;C12Q1/6869
• 代理公司: 蘇州國誠專利代理有限公司 32293
• 代理人: 李鳳嬌

1.一種適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一：染色質(zhì)預(yù)清除；

步驟二：對預(yù)清除后的染色質(zhì)進(jìn)行免疫共沉淀，然后加入轉(zhuǎn)座體系進(jìn)行轉(zhuǎn)座反應(yīng)；

步驟三：用AMPure beads對已轉(zhuǎn)座的DNA進(jìn)行純化；

步驟四：文庫擴(kuò)增；

步驟五：文庫大小選擇；

其中，步驟二中還包括標(biāo)簽片段化方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法，其特征在于：所述標(biāo)簽片段化方法具體為在PCR儀中37℃孵育20分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法，其特征在于：所述步驟三具體為向已轉(zhuǎn)座的DNA中加入終濃度為0.65×的AMpure beads，混勻后靜置，再置于磁分離架上靜置分離，將上清液轉(zhuǎn)到新管中，加入終濃度為1.8×的AMpurebeads，混勻后靜置，再置于磁分離架上靜置分離，然后去除上清并用80％乙醇溶液洗滌，重復(fù)該步驟，去除殘留的乙醇溶液，最后用EB溶液洗脫。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法，其特征在于：所述DNA與AMpure beads的體積比為1∶2～3。

5.一種采用如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法的試劑盒。

6.一種如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的適用于少細(xì)胞的染色質(zhì)免疫共沉淀測序方法在少細(xì)胞組蛋白修飾檢測中的應(yīng)用。