[發明專利]一種具有生物活性的COX18多肽及其合成方法與用途

在審

• 申請號: 201810160921.2
• 申請日: 2018-02-26
• 公開（公告）號: CN108315308A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 李臣鴻;雷維瓊
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;A61K38/44;A61P5/50;A61P3/04
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 劉天鈺

本發明提供了一種具有生物活性的COX18多肽，該多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LLPAGWILSH LETYRRPE。本發明同時還提供了利用化學合成的方法?Fmoc法所合成COX18多肽的方法及用途，用于制備抑制糖誘導的胰島素的分泌、抵抗胰島素耐受、抵抗高胰島素血癥和減輕體重的藥物中。本發明發現了一個新的多肽COX18是人的細胞色素c氧化酶8A的第52?69的部分，不同于以前的豬的序列。該序列與此前的序列相比，僅僅從氨基酸來講就有38.88％的氨基酸不同。況且該序列因為是人源的，故其在用于人體會具有更好的同源性，更少的免疫反應和副作用。

技術領域

本發明提供了一種COX18新多肽以及采用化學合成的方法-Fmoc法合成COX18多肽的工藝，采用該方法所合成的COX18多肽在動物體內體外實驗，證明其具有生物活性；并且本發明中還提供了所述COX18多肽的用途，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

短肽COX_52-69是一條含有18個氨基酸的多肽，最初是從豬的小腸中分離純化出來的，經氨基酸序列比對后發現其與豬細胞色素氧化酶Ⅷ的第52至69完全重疊，所以命名COX_52-69。其序列為LLPAGWVLSH LDSYKKRE。用生化分離純化得到的COX_52-69多肽做功能實驗發現該多肽能夠抑制葡萄糖引起的胰島素的分泌，該發現目前已于2013年10月11日申請中國發明專利，申請號為201310471571.9。在該專利申請中通過從生物組織(豬腸道)中分離純化獲得COX_52-69多肽，但是從生物組織中分離純化獲得COX_52-69多肽是一個高成本的過程。為此需要尋求一種非生化分離的方法以獲取有活性的該肽，并能夠提高了產量和降低了成本。本申請的申請人針對以上研究于2017年3月29日申報了一項中國發明專利，申請號為201710194719.7，該申請提供了一種通過化學合成方法獲得具有生物活性的COX_52-69多肽。然而，上述兩項專利中所提供的COX_52-69多肽在性能上仍存在一些需要進一步提高之處。

發明內容

本發明解決了現有技術中的不足，提供了一種具有生物活性的COX18多肽，同時還提供了該COX18多肽的固相合成方法，并且利用化學合成的COX18多肽在動物體內體外實驗，均發現COX18多肽有抑制葡萄糖引起的胰島素分泌的功能、抵抗胰島素耐受、抵抗高胰島素血癥以及減輕體重的作用。

實現本發明上述目的所采用的技術方案為：

一種具有生物活性的COX18多肽，該多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LLPAGWILSH LETYRRPE。該序列是人的細胞色素氧化酶Ⅷ的第52-69的部分，不同于以前的豬的序列。

上述COX18多肽的固相合成方法，包括以下步驟：

(1)、縮合反應：使用DMF預溶脹樹脂，濾去溶劑備用；向反應柱中加入脫保護試劑，反應后脫去樹脂上的的FMoc保護基團，抽干，繼續采用DMF清洗后抽干，并檢測；

稱取第一個Fmoc-氨基酸Fmoc-GLu(tBu)-OH，同時稱取HOBt備用，將二者同時加入反應柱中，并且溶于DCM中，然后加入DIC并攪拌；稱取DMAP投入反應柱中；氨基酸與反應試劑一同反應，反應完畢后抽干并用DMF清洗；向反應柱中加入脫保護試劑，反應后，脫去樹脂上的的FMoc保護基團，抽干，繼續采用DMF清洗后抽干，并檢測；

接下來的按照COX18多肽的順序重復添加肽鏈上的下一氨基酸，直至整條肽鏈18個氨基酸全部添加完成并檢測通過；全部完成后，使用無水甲醇清洗并使用抽濾瓶將其抽干；

(2)、肽鏈的切割：在抽干的合成肽樹脂中加入切割液，在通風櫥中室溫攪拌裂解，使用砂芯漏斗過濾除去樹脂，收集濾液，濾液經乙醚萃取后放置于干燥瓶內進行干燥，直至其成為白色粉末，即制得多肽粗品；