[發明專利]有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留檢測方法及其試紙條和制備方法

在審

• 申請號: 201810160607.4
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN110196322A
• 公開（公告）日: 2019-09-03
• 發明（設計）人: 馮銳;王丁力;龍飛;方鐵錚;楊凱
• 申請（專利權）人: 廣東志道醫藥科技有限公司;廣州漢騰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留檢測方法，包括以下步驟：通過動物細胞進行重組人乙酰膽堿酯酶的表達，重組人乙酰膽堿酯酶純化后用膠體金進行標記，農藥完全抗原與農藥小分子競爭性地與重組人乙酰膽堿酯酶結合；將膠體金標記的重組人乙酰膽堿酯酶、農藥完全抗原、重組人乙酰膽堿酯酶抗體等組裝成試紙條；需要檢測的樣品經前處理后，用提取溶劑提取，得到樣品溶液，將適量樣品溶液滴加到樣品墊上，樣品溶液將會向吸水墊端移動，待3～15分鐘后，根據檢測線和控制線的顯色情況，判斷樣品中是否含有有機磷類或氨基甲酸酯類農藥殘留。本發明可對大部分有機磷類和氨基甲酸酯類農藥進行特異性識別，檢測范圍寬，靈敏度高。

技術領域

本發明涉及對農藥殘留的檢測領域，具體涉及一種有機磷類農藥和氨基甲酸酯類農藥殘留的檢測方法及其試紙條和制備方法。

背景技術

有機磷類農藥和氨基甲酸酯類農藥均為乙酰膽堿酯酶抑制劑，在人、哺乳動物和昆蟲等體內，可以與乙酰膽堿酯酶不可逆的結合，抑制乙酰膽堿酯酶的活性，導致乙酰膽堿酯酶無法水解神經突出間隙內的乙酰膽堿，使乙酰膽堿持續刺激神經節，造成肌肉的強直收縮和衰竭等現象，即中毒現象的發生，有機磷類農藥與乙酰膽堿酯酶結合的作用機制如下：

有機磷類農藥與乙酰膽堿酯酶的結合包括兩個階段，結合階段和磷酸化階段，上圖中K_d是反應物和復合體之間的解離常數，K_p是磷酸化常數，K_i是雙分子抑制常數，它等于K_p/K_d，由于K_d是酶-抑制劑復合體離解程度的衡量，它與結合程度有關，并取決于抑制劑的分子結構和空間狀態，磷酸化反應性能的改變則影響到磷酸化常數K_p，因此，抑制劑的空間效應、立體特異性、磷酸化反應性能、是否帶正電荷等特征均會影響有機磷類農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制性能。

氨基甲酸酯類農藥與乙酰膽堿酯酶結合的作用機制如下：

氨基甲酸酯類農藥與乙酰膽堿酯酶的結合同樣包括兩個階段，結合階段和氨基甲酰化階段，上圖中K_d是反應物和復合體之間的解離常數，K_c是氨基甲酰化常數，K_i是雙分子抑制常數，它等于K_p/K_c，氨基甲酰化的酶并沒有磷酸化的酶穩定，因此決定氨基甲酸酯類農藥抑制性能的主要是酶-氨基甲酸酯類農藥復合體的結合性能，即與氨基甲酸酯類農藥的空間結構、是否帶有正電荷等特征油管。

因此，結構不同的有機磷類農藥和氨基甲酸酯類農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制能力均有一定的差別。

目前，基于酶抑制法進行有機磷類農藥和氨基甲酸酯類農藥檢的方法主要是GB/T5009.199中的紙片法和酶抑制率法，但是其靈敏度和穩定性較差，尤其是所用的乙酰膽堿酯酶由動物體內提取，批間穩定性差異很大，無法達到準確的檢測結果。

利用膠體金免疫層析試紙條進行農藥殘留檢測的產品目前也有出現，但是其主要針對某一種或幾種農藥的檢測，實際運用中需要很多條試紙條同時進行檢測，費時費力，而且也增加了成本。

發明內容

本發明的目的是針對以上現有技術存在的缺陷，提供一種可同時檢測有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留的簡便準確的檢測方法，可用于蔬菜、水果、糧食等產品中有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留的快速檢測和初篩。

為達到上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留檢測方法，包括以下步驟：

(1)通過動物細胞進行重組人乙酰膽堿酯酶的表達，重組人乙酰膽堿酯酶純化后用膠體金進行標記，農藥完全抗原與農藥小分子競爭性地與重組人乙酰膽堿酯酶結合；