[發明專利]一種固相合成多肽的方法、合成的磁性納米探針及其應用

有效

• 申請號: 201810160445.4
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108314700B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 叢海林;于冰;楊振;單玉領
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04;B01J13/02;H01F1/00;A61K49/00
• 代理公司: 北京東方芊悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11591
• 代理人: 彭秀麗

本發明屬于多肽合成技術領域，具體涉及一種固相合成特定序列多肽的方法，該方法合成的磁性納米探針，及其在篩選腫瘤靶向多肽藥物中的應用。本發明所述的固相合成多肽的方法，利用磁性酚醛樹脂復合納米顆粒作為固相載體進行特定氨基酸序列或氨基酸個數多肽的合成。該方法使用具有磁性的固相載體，便于分離及提取，同時該復合結構固相載體能夠簡便的合成所需特定序列的多肽，可以作為磁性探針用于多種用途。

技術領域

本發明屬于多肽合成技術領域，具體涉及一種固相合成特定序列多肽的方法，該方法合成的磁性納米探針，及其在篩選腫瘤靶向多肽藥物中的應用。

背景技術

多肽作為一種有機聚合物，因其具有多種功能性和良好的生物相容性而受到越來越多的關注，使得多肽的化學合成方法也成為了有機合成領域的一大重要區域。目前，多肽合成的原理主要是以氨基酸為基本單元，并在催化劑的作用下，通過氨基酸之間羧基與氨基的反應形成酰胺鍵將進行連接，并以此實現多肽鏈的增長。但是，在傳統的多肽有機合成方法中，相連接的氨基酸之間的羧基與氨基的連接通常僅僅依靠氨基酸之間的自由結合，以此得到的多肽通常都是氨基酸無規則連接的多肽結構。可見，現有多肽合成方法難以得到特定序列或特定長度氨基酸序列的多肽，得到的多肽產物也難以應用。

隨著Merrifield提出了多肽的固相合成方法(Biochemistry，1964，3(3)：1385)，多肽合成技術實現了質的飛越，而固相多肽合成技術也成為了現代多肽合成的主要方法。該方法首先需要選擇合適的固相載體，通過在載體表面偶聯Linker來實現多肽的生長和切割，進而將一端基團保護的氨基酸逐個接枝，形成多肽鏈。目前常見的固相多肽合成載體主要是以聚苯乙烯為基體的Wang樹脂，也有報道稱可以采用聚丙烯酰胺和聚乙二醇等作為固相載體。固相多肽合成方法根據氨基酸保護基團的不同，通常可以分為Fmoc法和Boc法，而無論采用哪一種方法，都需要注意對于干擾基團的封閉和重要基團的保護。固相合成的優點主要表現在最初的反應物和產物都是連接在固相載體上，因此可以在一個反應容器中進行所有的反應，便于自動化操作，加入過量的反應物可以獲得高產率的產物，同時產物很容易分離。固相多肽合成方法不僅簡便、高效，還可以根據需要調整投料順序，合成特定序列或特定氨基酸數量的多肽產品。

隨著固相多肽合成技術的發展，多肽的合成越來越朝向規則化、多樣化發展，并且其應用領域也隨之進一步擴展，尤其在靶向藥物篩選中發揮了重要的作用。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種固相合成多肽的方法，以解決現有技術中多肽合成難以得到特定序列或特定長度氨基酸序列的多肽的問題。

為解決上述技術問題，本發明所述的一種固相合成多肽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a)制備表面帶有酚羥基的復合固相載體；

(b)在所述復合固相載體的表面偶聯對羥甲基苯氧乙酸作為Linker；

(c)以步驟(b)制得的表面偶聯有對羥甲基苯氧乙酸的Linker作為固相載體，以Fmoc氨基保護的氨基酸作為單體，將氨基酸接枝在固相載體上，進行多肽的合成。

所述步驟(a)中，所述復合固相載體為Fe₃O₄@SiO₂@PF三層磁性核殼結構的微球。

所述步驟(a)中，所述Fe₃O₄@SiO₂@PF三層磁性核殼結構的微球的制備包括如下步驟：

(a-1)取超順磁性Fe₃O₄納米顆粒分散于無水乙醇中，加入氨水混勻后，再加入TEOS進行反應，反應結束后將產物進行磁性分離，得到Fe₃O₄@SiO₂納米顆粒；