[發明專利]一種固相合成多肽的方法、合成的磁性納米探針及其應用

有效

• 申請號: 201810160445.4
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108314700B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 叢海林;于冰;楊振;單玉領
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04;B01J13/02;H01F1/00;A61K49/00
• 代理公司: 北京東方芊悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11591
• 代理人: 彭秀麗

1.一種固相合成多肽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（a）制備表面帶有酚羥基的復合固相載體，所述復合固相載體為Fe₃O₄@SiO₂@PF三層磁性核殼結構的微球，所述Fe₃O₄@SiO₂@PF三層磁性核殼結構的微球的制備包括如下步驟：

（a-1）取超順磁性Fe₃O₄納米顆粒分散于無水乙醇中，加入氨水混勻后，再加入TEOS進行反應，反應結束后將產物進行磁性分離，得到Fe₃O₄@SiO₂納米顆粒；

（a-2）將得到的Fe₃O₄@SiO₂納米顆粒分散于乙醇溶液中，并加入 CTAB進行反應，隨后加入間苯二酚、TEOS、甲醛溶液及氨水進行反應，將反應產物離心分離，即得所需的Fe₃O₄@SiO₂@PF三層磁性核殼結構的微球；

（b）在所述復合固相載體的表面偶聯對羥甲基苯氧乙酸作為Linker；

（c）以步驟（b）制得的表面偶聯有對羥甲基苯氧乙酸的Linker作為固相載體，以Fmoc氨基保護的氨基酸作為單體，將氨基酸接枝在固相載體上，進行多肽的合成。

2.根據權利要求1所述的固相合成多肽的方法，其特征在于，所述步驟（b）中，具體包括：取步驟（a）中得到的表面帶有酚羥基的復合固相載體分散于DMF或DCM中，并加入對羥甲基苯氧乙酸，在HOBT/DIC/DMAP體系下進行反應。

3.根據權利要求1所述的固相合成多肽的方法，其特征在于，所述步驟（c）中，所述多肽的合成包括特定序列多肽的合成，具體包括如下步驟：

（c-1）將步驟（b）得到的表面偶聯對羥甲基苯氧乙酸的復合固相載體分散于DMF或DCM溶液中，備用；

（c-2）向上述溶液中加入Fmoc保護氨基酸進行反應，將產物進行磁性分離，洗滌后加入封羥基端溶液進行反應，以封閉未反應的羥基，待反應結束后，洗滌并脫除Fmoc保護基團，洗滌，備用；

（c-3）向步驟（c-2）所得的產物中加入含有待連接氨基酸的活潑酯溶液，與固相載體混合均勻進行反應，并對產物進行磁性分離，備用；

（c-4）向產物中加入封氨基端溶液進行反應，以封閉未反應的氨基，反應結束后產物進行磁性分離，洗滌并脫除Fmoc保護；

（c-5）重復上述步驟（c-3）-（c-4），以得到預定氨基酸序列的多肽鏈。

4.根據權利要求3所述的固相合成多肽的方法，其特征在于：

所述步驟（c-2）中，所述加入Fmoc保護氨基酸進行反應的步驟是在HOBT/DIC/DMAP體系下進行反應；

所述步驟（c-3）中，所述活潑酯溶液為HOBT/HBTU/DIEA溶劑體系。

5.根據權利要求4所述的固相合成多肽的方法，其特征在于：

所述步驟（c-2）中，所述封羥基端溶液為含有苯甲酸酐、DCC、DMAP的DMF或DCM溶液；

所述步驟（c-4）中，所述封氨基端溶液為醋酸酐-吡啶混合液。