[發(fā)明專利]一種口蹄疫病毒3B蛋白抗體的ELISA檢測(cè)方法及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810160047.2
• 申請(qǐng)日: 2018-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN108387741A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏婕;魏玉榮;苗書魁;汪萍;郭會(huì)玲;米曉云;薛英;王延;馬文戈;黃炯;薛晶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 西安研創(chuàng)天下知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61239
• 代理人: 楊鳳娟

1.一種口蹄疫病毒3B蛋白抗體的ELISA檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、以含O型Akesu/58-2毒株3B基因的pCAGGS-3B質(zhì)粒為模板,擴(kuò)增3B蛋白基因,并克隆至pET-30a(+)載體,進(jìn)行原核表達(dá)及純化；分別以Akesu/58-2型口蹄疫病毒、純化的3B蛋白為抗原；

步驟2、將3B標(biāo)準(zhǔn)蛋白用0.05mol/l pH9.5的碳酸鹽溶液CBS稀釋成1.5mg/ml,4℃16h包被酶標(biāo)板,封閉液為含1%明膠;根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量取出所需酶標(biāo)板并標(biāo)記對(duì)照孔和樣品孔,樣品孔加入工作濃度的兔抗牛HRP酶標(biāo)抗體和待測(cè)病毒培養(yǎng)液各100ul，對(duì)照孔加PBST，4℃孵育24h后移入酶標(biāo)板上相應(yīng)的孔中,37℃孵育45min后用PBST洗3次;

步驟3、每個(gè)樣品孔加入工作濃度的酶標(biāo)二抗, 37℃孵育45min,PBST洗5次后加入底物,室溫反應(yīng)10min,加入終止液終止反應(yīng)；用酶標(biāo)儀讀取各孔OD值;結(jié)果判定,根據(jù)各樣品的B/Bo在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度,或代入回歸方程計(jì)算樣品質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值X,求其反對(duì)數(shù),即為樣品中所含3B蛋白的質(zhì)量濃度。

2.一種口蹄疫病毒3B蛋白抗體的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括3B蛋白包被的檢測(cè)板、工作濃度的兔抗牛HRP酶標(biāo)抗體、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、TMB顯色液、1N鹽酸。