[發明專利]一種檢測心型脂肪酸結合蛋白的試劑盒

在審

• 申請號: 201810158547.2
• 申請日: 2018-02-26
• 公開（公告）號: CN108490186A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 王賢俊;鄭蓓蕾
• 申請（專利權）人: 王賢俊
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 溫州名創知識產權代理有限公司 33258
• 代理人: 陳加利

本發明公開了一種檢測心型脂肪酸結合蛋白的試劑盒，所述試劑盒原理基于膠乳增強免疫比濁法，其技術方案在于其含有h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒，h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒先由無花果蛋白酶將h－FABP抗體切割成F(ab')2片段，再將F(ab')2片段交聯于羧基膠乳微球上，形成h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒，從而顯著降低Fc的非特異性結合，實現與樣本抗原高效結合，在37℃恒溫，波長為520nm下，測定吸光度，計算出樣品心型脂肪酸結合蛋白(h－FABP)含量。與傳統方法相比，本試劑盒抗體利用率高，準確度高，能有效控制批間差，值得進一步推廣使用。

技術領域

本發明涉及醫學檢測試劑盒領域，具體涉及一種檢測心型脂肪酸結合蛋白(h－FABP)的試劑盒。

背景技術

心型脂肪酸結合蛋白(h－FABP)是心臟中富含的一種新型小胞質蛋白。由132個氨基酸組成，分子量為15kDa。它具有高度心臟特異性，主要存在于心肌細胞中，但在心臟以外的組織中也有低濃度表達，如骨骼肌中存在微量。在心臟全部可溶性蛋白中h－FABP約占4％～8％。h－FABP可以和心肌內的長鏈脂肪酸相結合，將其轉運到線粒體中，最終氧化分解成三磷酸腺苷ATP，為心肌活動提供能量。因此h－FABP是重要的能源脂肪酸的載體蛋白。由于正常人的血漿和尿中不含或只含極微量h－FABP，當心肌細胞受損時，h－FABP被快速釋放到血液和尿中，在AMI的超急性期h－FABP的濃度在血液和尿中顯著升高。因此h－FABP的濃度變化可作為AMI早期診斷的較好指標且其敏感性和可預見性均較為理想。

目前市場上心型脂肪酸結合蛋白(h－FABP)檢測技術常用的方法有如下幾種：放射免疫測定法(RIA)、熒光免疫測定法(FIA)、時間分辨熒光免疫測定法(TRFIA)、酶聯免疫測定法(ELISA)、免疫傳感器技術、免疫膠體金技術、膠乳增強免疫比濁法等，以膠乳增強免疫比濁法居多。膠乳增強免疫比濁法屬于普通免疫比濁技術的衍生技術，克服了普通免疫比濁技術信號量非常有限的缺點，使抗體體積有了數量級上的增長，大幅提升了可檢測性，但該方法也存在巨大的技術難點，即抗體連接到膠乳微球上的方向無法控制，使得其活性及穩定性(包括不隨時間的改變而發生變化及批間一致性)不能保證。因此，找到一種抗體與膠乳微球間有效偶聯的方法，是本領域亟需解決的技術問題。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供了一種檢測心型脂肪酸結合蛋白(h－FABP)的試劑盒，以膠乳增強免疫比濁法為基礎，該試劑盒中含有h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒，該h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒運用抗體片段化技術，先由無花果蛋白酶將h－FABP抗體切割成F(ab')2片段，再將F(ab')2片段交聯于羧基膠乳微球上，形成h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒，從而顯著降低Fc的非特異性結合，實現與樣本抗原高效結合。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：試劑盒包括由試劑1和試劑2組成的液體雙試劑組分，其中

所述試劑1成分如下：

磷酸鹽緩沖液pH6.0-7.0 0.1-0.5mol/L

聚乙二醇8000 9-15g/L

疊氮鈉 0.01wt％

所述試劑2成分如下：

所述試劑1與試劑2的體積比為3:1。

進一步設置是所述的h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒的通用以下方法制備：運用抗體片段化技術，在含半胱氨酸的緩沖環境下，先由無花果蛋白酶對h－FABP抗體進行切割，形成h－FABP抗體F(ab')2片段和Fc的多肽碎片，經Protein A離心柱洗脫純化，去除Fc的多肽碎片，獲得純化的h－FABP抗體F(ab')2片段，再將h－FABP抗體F(ab')2片段交聯于羧基膠乳微球上，形成h－FABP抗體片段復合膠乳顆粒。