[發明專利]馬克斯克魯維酵母啟動子、分泌信號肽及其制備與應用

有效

• 申請號: 201810153537.X
• 申請日: 2018-02-22
• 公開（公告）號: CN108410870B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 呂紅;余垚;周峻崗
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/81;C12N15/65;C12N15/66;C12N1/19;C12N9/18;C12R1/645;C12R1/865
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明公開了一種優化的馬克斯克魯維酵母啟動子，其至少包括：a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或b)如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或c)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。還公開了一種優化的馬克斯克魯維酵母分泌信號肽，其至少包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列，以及一種優化的組合體，其至少包括如SEQ ID No.6所示的核苷酸序列。本發明還公開了含有上述馬克斯克魯維酵母啟動子和/或分泌信號肽的重組表達載體、基因工程菌及其制備方法與應用。本技術方案可顯著提升馬克斯克魯維酵母高效重組表達外源蛋白的能力，為推動馬克斯克魯維酵母表達系統在工業蛋白制造領域的應用奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種優化的馬克斯克魯維酵母啟動子、分泌信號肽及其組合體、含有該馬克斯克魯維酵母啟動子和/或分泌信號肽的重組表達載體、基因工程菌及其制備方法與應用。

背景技術

馬克斯克魯維酵母(Kluyveromyces marxianus，下文簡稱KM)是同宗配合的半子囊菌酵母，位于酵母科克魯維屬。KM通常在酸奶，馬乳酒，奶酪，牛奶，以及甘蔗葉子中出現。KM是一種被普遍認可的食品級的酵母。它已經通過了FDA的GRAS認證，歐盟的QPS認證，還被中國衛計委批準為新食品原料。由于其安全性高，KM在生產食用、飼用和藥用蛋白領域具有得天獨厚的優勢。但是KM目前缺乏高效的表達元件和配套的表達載體，限制了KM表達系統的發展。

發明內容

有鑒于現有技術的上述缺陷，本發明提供了一種優化的馬克斯克魯維酵母啟動子、分泌信號肽及其組合體、含有該馬克斯克魯維酵母啟動子和/或分泌信號肽的重組表達載體、基因工程菌及其制備方法與應用。其具體技術方案如下：

本發明在第一方面提供了一種優化的馬克斯克魯維酵母啟動子，其核苷酸序列至少包括：

a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或

b)如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或

c)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

本發明在第二方面提供了一種優化的馬克斯克魯維酵母分泌信號肽，其核苷酸序列至少包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；其氨基酸序列至少包括如SEQ ID No.5所示的氨基酸序列。

本發明在第三方面提供了一種優化的馬克斯克魯維酵母啟動子和分泌信號肽的組合體，其核苷酸序列至少包括如SEQ ID No.6所示的核苷酸序列。

本發明在第四方面提供了一種重組表達載體，其包含本發明在第一方面提供的馬克斯克魯維酵母啟動子和/或本發明在第二方面提供的馬克斯克魯維酵母分泌信號肽。

優選地，上述重組表達載體還包含馬克斯克魯維酵母自主復制序列、馬克斯克魯維酵母菊粉酶終止子基因序列和營養缺陷篩選標記基因序列。

更優選地，上述營養缺陷篩選標記基因序列選自URA3基因、HIS3基因和ADE2基因中的一種或幾種。

最優選地，上述營養缺陷篩選標記基因序列為URA3基因。

在較優實施例中，上述重組表達載體的核苷酸序列至少包括：

a)、如SEQ ID No.22所示的核苷酸序列；或

b)、如SEQ ID No.23所示的核苷酸序列。

本發明在第五方面提供了一種基因工程菌，其包含本發明在第一方面提供的馬克斯克魯維酵母啟動子和/或本發明在第二方面提供的馬克斯克魯維酵母分泌信號肽。

本發明還提供了一種基因工程菌，其包含本發明在第四方面提供的重組表達載體。

優選地，上述基因工程菌的宿主菌為酵母。