[發(fā)明專利]一種細(xì)胞添加劑及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810152448.3
• 申請(qǐng)日: 2018-02-15
• 公開（公告）號(hào): CN110157662A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閆文俊;郭永珍;夏云龍;江偉程;張嘉欣;陶凌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 郭永珍
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077;C12N5/071
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種細(xì)胞添加劑及其制備方法，屬于2型糖尿病體外細(xì)胞研究領(lǐng)域，該細(xì)胞添加劑包括BSA組分和軟脂酸組分，本發(fā)明能夠?qū)⒏邷剀浿峤M分溶液與BSA組分溶液充分混合與溶解，通過(guò)該技術(shù)方案克服了現(xiàn)有軟脂酸組分溶液配制過(guò)程中溶劑毒性、BSA結(jié)合力不足、軟脂酸組分難溶解等技術(shù)問(wèn)題，具有簡(jiǎn)單易操作、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，配置出的細(xì)胞添加劑能夠成功誘導(dǎo)2型糖尿病心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞損傷，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及2型糖尿病體外細(xì)胞研究領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞添加劑及其制備方法。

背景技術(shù)

2型糖尿病是一種以糖脂代謝異常為主要表現(xiàn)的慢性代謝性疾病。在2型糖尿病的致病因素中，高血糖通過(guò)引起代謝紊亂直接影響細(xì)胞的代謝，高血脂引起的高濃度的游離脂肪酸可直接誘發(fā)細(xì)胞損傷。高血脂對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞均有不同程度的損傷，是導(dǎo)致2型糖尿病并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的主要致病因素之一。

在體外研究中，為了模擬2型糖尿病所致的器官損傷，除在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加高濃度的葡萄糖外，通常需要添加高濃度的軟脂酸（棕櫚酸，Palmitic acid），這是因?yàn)檐浿崾谴嬖谟趧?dòng)物、植物及微生物中最常見(jiàn)的游離脂肪酸。正常情況下，人體血液中軟脂酸的濃度均值約為100umol/L，肥胖和2型糖尿病情況下血液中軟脂酸濃度顯著增高。軟脂酸鈉（棕櫚酸鈉，Sodium palmitate）是軟脂酸的鈉鹽，同等摩爾濃度的軟質(zhì)酸鈉具有與軟脂酸相同的細(xì)胞脂毒性。因此，軟脂酸和軟脂酸鈉被認(rèn)為是模擬細(xì)胞脂毒性的理想試劑。

然而，由于配制方法不當(dāng)，市場(chǎng)上也無(wú)可直接使用的軟脂酸或軟脂酸鈉細(xì)胞添加劑，導(dǎo)致很多從事2型糖尿病的科研工作者無(wú)法順利開展體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)有技術(shù)中，有人采用甲醇、乙醇、氫氧化鈉溶液等溶劑配制軟脂酸或軟脂酸鈉，其缺點(diǎn)是這些溶劑本身對(duì)細(xì)胞就有毒性，而且這些溶劑是否影響軟脂酸或軟脂酸鈉本身的性質(zhì)也不清楚。

近年來(lái)，有人利用牛血清白蛋白（BSA）可與軟脂酸、或軟脂酸鈉結(jié)合的特點(diǎn)，采用高濃度的BSA溶液配制軟脂酸、或軟脂酸鈉。上述方法的優(yōu)點(diǎn)是溶劑本身對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，但仍存在以下問(wèn)題：

1.對(duì)BSA未進(jìn)行甄選，導(dǎo)致其結(jié)合力不足；

2.未掌握溶解軟脂酸或軟脂酸鈉的合適條件，不能充分溶解軟脂酸或軟脂酸鈉；

3.配制的BSA-軟脂酸、或BSA-軟脂酸鈉溶液很快有固體析出，不能有效發(fā)揮脂毒性。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，提供一種細(xì)胞添加劑及其制備方法，該方法能夠克服現(xiàn)有軟脂酸組分溶液配制過(guò)程中溶劑毒性、BSA結(jié)合力不足、軟脂酸組分難溶解等技術(shù)問(wèn)題，具有簡(jiǎn)單易操作、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，配置出的細(xì)胞添加劑能夠成功誘導(dǎo)2型糖尿病心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞損傷。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種細(xì)胞添加劑，其特征在于，包括BSA組分和軟脂酸組分。

進(jìn)一步的，所述BSA組分的溶液濃度為5-20g/100ml，所述軟脂酸組分的溶液濃度為2-20mmol/L。

進(jìn)一步的，所述BSA組分包括脫脂BSA、無(wú)脂BSA、或低脂BSA。

進(jìn)一步的，所述軟脂酸組分包括軟脂酸、或軟脂酸鈉。

本發(fā)明的一種細(xì)胞添加劑具有以下有益效果：

該細(xì)胞添加劑不存在軟脂酸、或軟脂酸鈉固體析出的問(wèn)題，能夠避免溶劑的直接細(xì)胞毒性，實(shí)現(xiàn)對(duì)脂毒性的精確定量。

一種細(xì)胞添加劑的制備方法，其特征在于：

a1）將高溫溶解的軟脂酸組分溶液與BSA組分溶液混合；