[發(fā)明專(zhuān)利]阻斷型PD-L1駝源單域抗體及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810151835.5
• 申請(qǐng)日: 2018-02-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110144010B9
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬(wàn)亞坤;朱敏;沈曉寧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海洛啟生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/28
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/28;C07K16/46;C07K19/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 劉妍珺;徐迅

本發(fā)明涉及一種駝源單域抗體，該抗體特異識(shí)別程序性死亡受體-配體1(PD-L1)，能夠有效阻斷PD-L1與其受體PD-1的相互作用，其阻斷效果優(yōu)于上市的阿特珠單抗。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明公布了一種PD-L1駝源單域抗體及其衍生蛋白的編碼序列、制備方法和用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)或生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及一種抗PD-L1的駝源單域抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤免疫逃逸是腫瘤細(xì)胞通過(guò)自身或微環(huán)境的改變來(lái)逃避集體的免疫識(shí)別和攻擊。腫瘤免疫治療因其損傷小且能有效控制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移等優(yōu)勢(shì)，成為臨床腫瘤治療的迫切需要。程序性死亡因子1/程序性死亡因子1配體1(PD-1/PD-L1)作為一對(duì)負(fù)性免疫共刺激分子參與了腫瘤免疫逃逸。PD-1/PD-L1是CD28/B7協(xié)同刺激分子超家族的新成員，可以介導(dǎo)負(fù)性協(xié)同刺激信號(hào)，能有效抑制T、B細(xì)胞功能和增殖，同時(shí)減少細(xì)胞因子IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌，該抑制途徑參與的免疫調(diào)節(jié)在腫瘤免疫、移植免疫、病毒感染、自身免疫等疾病的研究中都具有重要意義。

程序性死亡因子1配體1(programmeddeath1ligand1，PD-L1)又稱(chēng)CD274，是B7家族成員。PD-L1屬于I型跨膜蛋白，分子量約為30-35KD。其受體PD-1是免疫球蛋白B7-CD28家族成員之一，由胞外段、疏水性跨膜區(qū)、胞內(nèi)段組成，其胞內(nèi)段含有免疫受體酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif，ITIM)、免疫受體酪氨酸轉(zhuǎn)換基序(immunoreceptortyrosine-basedswitchmotif，ITSM)。其中，ITSM的激活與效應(yīng)性T細(xì)胞應(yīng)答活性密切相關(guān)。PD-1可表達(dá)于活化的CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷T細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞上。另外，PD-1也表達(dá)于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryTcell，Treg)，并能促進(jìn)Treg細(xì)胞的增殖，抑制免疫應(yīng)答。人PD-L1分子可組成性表達(dá)于胎盤(pán)、心、肝、肺、腎、骨骼肌和部分造血細(xì)胞等非淋巴組織，在胸腺、淋巴結(jié)和脾臟等淋巴組織中也有適度表達(dá)。此外，PD-L1在肺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌等癌組織細(xì)胞上也具有表達(dá)，且癌組織經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)亦可上調(diào)其表達(dá)。在健康的機(jī)體中，PD-1/PD-L1信號(hào)通路的激活可最大程度減少免疫反應(yīng)對(duì)周?chē)M織的損傷，避免發(fā)生自身免疫疾病。然而，PD-1/PD-L1信號(hào)通路激活改變腫瘤局部微環(huán)境使得T細(xì)胞免疫效應(yīng)降低，從而介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。PD-L1在腫瘤上的表達(dá)與食管癌、胰腺癌和其它類(lèi)型的癌癥的生存率下降相關(guān)，突出了該通路可以作為新的有前途的腫瘤免疫治療靶點(diǎn)，并以得到諸多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

單域抗體作為一種新型的小分子抗體片段，由駝?lì)愄烊坏闹劓溈贵w重鏈可變區(qū)(VHH)克隆獲得。單域抗體的分子量?jī)H有12-15KD，是常規(guī)單克隆抗體的十分之一，尺寸只有2-4nM，因此也被稱(chēng)作納米抗體(Nanobody，Nb)。單域抗體具有優(yōu)良的生物學(xué)特性，不僅擁有完整的抗原結(jié)合位點(diǎn)，還能夠克服天然抗體分子量大的弊端，具有很好的組織穿透性，特異性高，水溶性好。因其特殊的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，兼具了傳統(tǒng)抗體與小分子藥物的優(yōu)勢(shì)，幾乎避免了傳統(tǒng)抗體的開(kāi)發(fā)周期長(zhǎng)，穩(wěn)定性較低，保存條件苛刻等缺陷，在免疫診斷和治療中顯示出廣闊的應(yīng)用前景。本研究領(lǐng)域仍亟需能與PD-L1結(jié)合，且可以阻斷PD-L1/PD-1結(jié)合的抗體，尤其是抗PD-L1單域抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明第一方面，提供了一種抗PD-L1單域抗體VHH鏈的互補(bǔ)決定區(qū)CDR，所述VHH鏈的互補(bǔ)決定區(qū)CDR包含：

SEQ ID NO.:5所示的CDR1、SEQ ID NO.:6所示的CDR2，SEQ ID NO.:7所示的CDR3。

本發(fā)明第二方面，提供了一種抗PD-L1單域抗體的VHH鏈，所述VHH鏈包括框架區(qū)FR和本發(fā)明第一方面所述的互補(bǔ)決定區(qū)CDR。

在另一優(yōu)選例中，所述的框架區(qū)FR選自下組的一種或多種：