[發明專利]一種乳酸鏈球菌素的提取方法

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• 申請號: 201810150346.8
• 申請日: 2018-02-13
• 公開（公告）號: CN108374033A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 鐘文文
• 申請（專利權）人: 鐘文文
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K14/315;C07K1/14;C12R1/46
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 李芙蓉;馮建基

本發明公開了一種乳酸鏈球菌素的提取方法，涉及一種從微生物中提取制得乳酸鏈球菌素的方法。本發明的乳酸鏈球菌素的提取方法包括以下步驟：發酵乳酸鏈球菌，得到乳酸鏈球菌發酵液；調節發酵液的pH值至4～5，震蕩吸附；離心分離菌體后，用磷酸鈉溶液洗滌菌體；震蕩洗脫，分離得到上清液；濃縮上清液；除雜。本發明的乳酸鏈球菌素的提取方法操作簡便、提取得到的乳酸鏈球菌素純度高、穩定性強，因此適于大規模的工業化生產，具有很高的經濟效益。本發明屬于分子微生物技術領域。

技術領域

本發明涉及分子微生物技術領域，具體涉及一種從微生物中提取制得乳酸鏈球菌素的方法。

背景技術

細菌素是某些細菌在代謝過程中通過核糖體合成機制產生的一類具有抑菌活性的多肽或前體多肽。對同種近緣菌株呈現狹窄的抑制譜，通過在靶細胞上穿孔、抑制肽聚糖合成，與核糖體或tRNA相互作用抑制蛋白質合成，直接降解靶細胞DNA，從而起到抑菌效果。

細菌素是由細菌或古細菌基因編碼，核糖體合成的一類殺菌蛋白或多肽，細菌素的生產菌對自身分泌的細菌素具有免疫力。細菌素是存在于細菌生活的天然環境中的一類抗菌物質，早期的研究認為細菌素只對同種或具有近緣關系的細菌起作用，然而，近年來越來越多的研究結果表明，一種細菌素也可能對其他多種細菌起到抑殺作用。

1925年，A·格雷希亞首次報道了大腸桿菌V株產生一種對大腸桿菌Φ株有殺菌作用的物質，這類物質被稱作大腸桿菌素。以后又發現許多大腸桿菌都能產生大腸桿菌素，而且產大腸桿菌素因子可以從供體細胞轉移到受體細胞。

20世紀70年代以后，對細菌素的研究進入分子生物學水平，開展了對細菌素的化學性質、結構、生物合成、釋放和作用方式等方面的探索。利用細菌素或與噬菌體方法結合，可以有效地進行某些細菌的分型和病原菌的流行檢查。

大部分細菌素的產生和寄主細胞對細菌素的免疫性由質粒控制。細菌產生細菌素是細胞的致死過程。致死物質按其性質可分為兩類，一類是低分子量的蛋白質或肽，很難在電子顯微鏡下觀察到這類物質的結構，對胰蛋白酶多不穩定；另一類是具有復雜結構的蛋白質顆粒，有噬菌體部分形態結構，易于在電子顯微鏡下觀察，對胰蛋白酶穩定。

乳酸鏈球菌素(Nisin)亦稱乳酸鏈球菌肽或音譯為尼辛，是乳酸鏈球菌產生的一種多肽物質，由34個氨基酸殘基組成，分子量約為3500Da。由于乳酸鏈球菌素可抑制大多數革蘭氏陽性細菌，并對芽孢桿菌的孢子有強烈的抑制作用，因此被作為食品防腐劑廣泛應用于食品行業。食用后在人體的生理pH條件和α—胰凝乳蛋白酶作用下很快水解成氨基酸，不會改變人體腸道內正常菌群以及產生如其它抗菌素所出現的抗性問題，更不會與其它抗菌素出現交叉抗性，是一種高效、無毒、安全、無副作用的天然食品防腐劑。

它能有效抑制引起食品腐敗的許多革蘭氏陽性細菌，如肉毒梭菌，金黃色葡萄球菌，溶血鏈球菌，利斯特氏菌，嗜熱脂肪芽抱桿菌的生長和繁殖，尤其對產生孢子的革蘭氏陽性細菌有特效。乳酸鏈球菌素的抗菌作用是通過干擾細胞v膜的正常功能，造成細胞膜的滲透，養分流失和膜電位下降，從而導致致病菌和腐敗菌細胞的死亡。它是一種無毒的天然防腐劑，對食品的色、香、味、口感等無不良影響。現己廣泛應用于乳制品、罐頭制品、魚類制品和酒精飲料中。

目前已經純化出多種細菌素，純化細菌素的方法多種多樣，主要有：有機溶劑沉淀法、吸附法、熱變性法、離子交換、凝膠層析、高效液相色譜等等。由于細菌素的活性極易受到外界物理化學條件的影響，為細菌素的提取帶來了很大的困難。現有的乳酸鏈球菌素制備方法操作復雜，制備困難，且產品純度低，不利于工業化生產。

發明內容

本發明的目的在于提供一種操作簡便、提取得到的乳酸鏈球菌素純度高、抗菌活性高的乳酸鏈球菌素的提取方法，用以解決現有的乳酸鏈球菌素制備方法操作復雜，制備困難，且產品純度低，不利于工業化生產的問題。

為實現上述目的，本發明的技術方案為一種乳酸鏈球菌素的提取方法，所述提取方法包括以下步驟：