[發明專利]一種高含量花青素芥菜品系及其選育方法

有效

• 申請號: 201810149560.1
• 申請日: 2018-02-13
• 公開（公告）號: CN108207620B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 李海渤;鄭立軍;葉添謀;潘春香;范文明;萬正杰
• 申請（專利權）人: 韶關學院
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;C12Q1/6895
• 代理公司: 廣州駿思知識產權代理有限公司 44425
• 代理人: 潘雯瑛

1.一種高含量花青素芥菜品系的選育方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)具有一種花青素來源的芥菜品系的選育：

紫色小白菜09N-742作母本，芥菜作父本雜交得到F1代，篩選F1代中表現型為紫色葉片的單株作母本，芥菜為輪回親本，連續回交后，篩選回交后代中表現型為紫色葉片的單株進行自交，然后利用基因標記一從自交后代中篩選得到純合體09N-742-B；

紫葉油菜p1029作母本，芥菜作父本雜交得到F1代，篩選F1代中表現型為紫色葉片的單株作母本，芥菜為輪回親本，連續回交后，篩選回交后代中表現型為紫色葉片的單株進行自交，然后利用基因標記二從自交后代中篩選得到純合體p1029-B；

紫葉芥菜1280-1作母本，芥菜作父本雜交得到F1代，篩選F1代中表現型為紫色葉片的單株作母本，芥菜為輪回親本，連續回交后，篩選回交后代中表現型為紫色葉片的單株進行自交，然后利用基因標記三從自交后代中篩選得到純合體1280-1-B；

2)具有兩種花青素來源的芥菜品系的選育：

純合體09N-742-B與純合體p1029-B雜交后自交，然后利用基因標記一和基因標記二，在自交后代中共同篩選得到純合體09N-742-p1029-B；

純合體p1029-B與純合體1280-1-B雜交后自交，然后利用基因標記二和基因標記三，在自交后代中共同篩選得到純合體1280-1-p1029-B；

3)具有三種花青素來源的芥菜品系的選育：純合體09N-742-p1029-B和純合體1280-1-p1029-B雜交后自交，然后利用基因標記一、基因標記二和基因標記三，從自交后代中共同篩選得到純合體09N-742-p1029-1280-1-B；

4)高含量花青素芥菜品系的選育：純合體09N-742-p1029-1280-1-B自交，得到高含量花青素的芥菜新品系；

所述的基因標記一是紫色小白菜09N-742基因組中調控花青素代謝基因的標記引物BVRCI613和標記引物BVRCI417；所述的基因標記二是紫葉油菜p1029基因組中調控花青素代謝基因的標記引物598-1；所述的基因標記三是紫葉芥菜1280-1基因組中調控花青素代謝基因的標記引物PLC871；

所述的標記引物BVRCI613具有序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；所述的標記引物BVRCI417具有序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；所述的標記引物598-1具有序列表中SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；所述的標記引物PLC871具有序列表中SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的高含量花青素芥菜品系的選育方法，其特征在于，在步驟1)中，所述連續回交的代數為5代。

3.根據權利要求2所述的高含量花青素芥菜品系的選育方法，其特征在于，在步驟1)中，所述連續回交在花蕾期進行，人工取出紫色葉片單株的雄蕊后進行人工授粉。

4.根據權利要求3所述的高含量花青素芥菜品系的選育方法，其特征在于，在步驟1)至3)中，所述自交的代數為1代。

5.權利要求1所述的高含量花青素芥菜品系的選育方法，其特征在于，步驟4)中高含量花青素芥菜品系的鑒定方法包括以下步驟：

a.取待測芥菜植株葉片，提取DNA做實驗組；分別取紫色小白菜09N-742植株、紫葉油菜p1029植株和紫葉芥菜1280-1植株的葉片，提取DNA做對照組；

b.待測芥菜植株的DNA依次與標記引物BVRCI613、標記引物BVRCI417、標記引物598-1和標記引物PLC871進行PCR擴增；紫色小白菜09N-742植株的DNA，依次與標記引物BVRCI613和標記引物BVRCI417進行PCR擴增；紫葉油菜p1029植株的DNA，與標記引物598-1進行PCR擴增；紫葉芥菜1280-1植株的DNA，與標記引物PLC871進行PCR擴增；

c.分別對步驟b的PCR擴增產物進行電泳并觀察條帶，在標記引物BVRCI613的PCR擴增產物電泳結果中，待測芥菜植株的電泳條帶與紫色小白菜09N-742植株的條帶相同；在標記引物BVRCI417的PCR擴增產物電泳結果中，待測芥菜植株的電泳條帶與紫色小白菜09N-742植株的條帶相同；在標記引物598-1的PCR擴增產物電泳結果中，待測芥菜植株的電泳條帶與紫葉油菜p1029植株的條帶相同；在標記引物PLC871的PCR擴增產物電泳結果中，待測芥菜植株的電泳條帶與紫葉芥菜1280-1植株的條帶相同；

d.同時符合步驟c中全部電泳結果的待測芥菜為所述高含量花青素芥菜品系。