[發明專利]一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質及其制備方法

在審

• 申請號: 201810148859.5
• 申請日: 2018-02-13
• 公開（公告）號: CN108374058A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 原霖;王傳彬;楊林;宋曉暉;吳佳俊;周智;劉穎昳;韓燾;董浩;張碩;倪建強
• 申請（專利權）人: 中國動物疫病預防控制中心（農業部屠宰技術中心）
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質及其制備方法。該方法包括如下步驟：制備高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的病毒液，滅活，得到滅活的病毒液；然后將滅活的病毒液和保護劑混合，凍干或真空干燥；保護劑中含有甘露醇、BSA、海藻糖、蔗糖和甘氨酸；最后通過均勻性評估、穩定性評估和定值，得到高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質。高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質不僅可用于評價檢測試劑和控制檢測質量，還為檢測研究、醫藥研究、應用研究提供了核酸標準物質的需求，同時為檢驗檢疫機構技術指導、服務出口企業提供技術上的支持。本發明具有重大的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質及其制備方法，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質即高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準樣品。

背景技術

WHO于1997年發布了丙型肝炎核酸國際標準物質，到目前為止已發布同類標準物質16種。我國核酸標準物質研制起步較晚，在國家標準物質資源共享平臺可查詢到的核酸標準物質僅有5種，涉及微生物及轉基因植物。近年來，研制動物病原核酸標準物質也有報道，主要為禽流感、新城疫和亞洲I型口蹄疫病毒核酸等。

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一種以懷孕母豬繁殖障礙、尤其哺乳仔豬呼吸困難為特征的高度接觸性傳染病。PRRSV分為歐洲型和美洲型兩種基因型，美洲型又分為經典美洲株和高致病性美洲株兩種基因亞型，三種亞型毒株在基因序列上存在一定差異。我國國內主要流行的是美洲型毒株，歐洲型毒株也偶有發現。PRRS在1987年首次暴發于美國，隨后在加拿大、歐洲與亞洲相繼出現，目前已經在世界范圍內流行，每年造成養殖業巨大的經濟損失。我國在1995年首次出現PRRS，隨后迅速蔓延。2006年在我國豬群全面暴發了體溫高、發病率高、死亡率高為主要臨床特征的豬“高熱病”，而導致該病的病原是較之前在國內流行的經典PRRSV發生變異的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(highly pathogenic PRRS，HP-PRRSV)。我國農業部發布“一二三類動物疫病病種名錄”將HP-PRRS列為一類動物疫病。豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法(GB/T 18090-2008)中規定采用RT-PCR方法對HP-PRRSV進行檢測，但目前尚無相應的核酸標準物質可用，無法評價檢測試劑和控制檢測質量。

發明內容

本發明的目的是提供一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質。

本發明提供了一種制備高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質的方法，可包括如下步驟：

(1)制備高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的病毒液；

(2)取步驟(1)制備的病毒液，滅活，得到滅活的病毒液；

(3)取步驟(2)得到的滅活的病毒液，保存，得到高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質。

所述步驟(1)依次可包括如下步驟：

(1-1)培養Marc-145細胞或PAM細胞；

(1-2)接種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒，培養；

(1-3)反復凍融；

(1-4)離心，收集上清液；

步驟(1-4)中收集的上清液即為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的病毒液。

步驟(1-1)中，所述Marc-145細胞具體可為ATCC的產品。

步驟(1-1)中，所述培養具體可為37℃、5％CO₂培養。