[發(fā)明專利]一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810148859.5
• 申請日: 2018-02-13
• 公開（公告）號: CN108374058A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 原霖;王傳彬;楊林;宋曉暉;吳佳俊;周智;劉穎昳;韓燾;董浩;張碩;倪建強
• 申請（專利權(quán)）人: 中國動物疫病預(yù)防控制中心（農(nóng)業(yè)部屠宰技術(shù)中心）
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種制備高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)的方法，包括如下步驟：

(1)制備高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的病毒液；

(2)取步驟(1)制備的病毒液，滅活，得到滅活的病毒液；

(3)取步驟(2)得到的滅活的病毒液，保存，得到高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，所述滅活為熱滅活或化學滅活。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，所述保存的方式為A1)或A2)：

A1)將滅活的病毒液和保護劑混合，然后凍干或真空干燥；所述保護劑中含有甘露醇、BSA、海藻糖、蔗糖和甘氨酸；

A2)將滅活的病毒液、RNA酶抑制劑、TE緩沖液和BSA混合。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述A1)中，“將滅活的病毒液和保護劑混合”為1體積份滅活的病毒液和0.5-1.5體積份保護劑混合。

5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于：

所述凍干的參數(shù)為：-20℃－-40℃冷凍4h－10h；

所述真空干燥的參數(shù)為：0.025mbar－0.1mbar條件下，4℃－20℃干燥2h－6h。

6.如權(quán)利要求1至5任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括步驟(4)：將步驟(3)得到的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)進行病毒滅活檢驗和/或支原體檢驗和/或病毒檢驗。

7.如權(quán)利要求1至6任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括步驟(5)：將步驟(3)得到的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)進行均勻性評估和/或穩(wěn)定性評估。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法還包括步驟(6)：將均勻性高且穩(wěn)定的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)進行定值；定值表示為標準值±擴展不確定度；

由若干個獨立實驗室使用數(shù)字PCR方法分別檢測2個以上均勻且穩(wěn)定的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)，得到特征值；然后對各個特征值進行統(tǒng)計處理，確定標準值；

使用統(tǒng)計學方法計算擴展不確定度，包括均勻性評估中引起的不確定度、穩(wěn)定性評估中引起的不確定度和定值中引起的不確定度。

9.采用權(quán)利要求1至8任一所述的方法制備的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸標準物質(zhì)。

10.權(quán)利要求3或4中所述的保護劑。